血清总补体溶血活性测定.pptVIP

血清总补体溶血活性测定（CH50试验） ; 补体;;补体系统按其性质与功能分三类;一、补体组成与命名;激活物质 抗原抗体复合物（Ag - Ab）、 聚合IgG、SPA、dDNA ;Fab段;Who are you ?;补体攻膜单位 细胞膜表面C3b5b与C6、C7、C8依次结合形成C5b678复合物。该复与物诱发C9在细胞膜表面共聚，形成膜表面通道结构MACs，造成胞膜穿孔损伤。;; 补体参与溶血反应 　　 溶血反应是指补体参与抗体致敏红细胞溶解反应. 参与反应成分有（1）红细胞；（2）抗红细胞抗体，也称溶血素；（3）补体 ; 补体参与溶血试验 溶血试验 是将抗红细胞抗体(通常称为溶血素)与相应红细胞混合，当补体存在时，红细胞即被溶解。此种特异性溶血现象肉眼可见，广泛用于血清总补体活性测定。此外，溶血试验常用于补体结合试验中作为指示系统。 ;溶血反应用途;　血清总补体溶血活性测定 试验原理：血清补体主要活性是溶细胞作用。红细胞与特异性抗体结合后可激活补体,导致红细胞溶解。补体活性与溶血程度相关，但不是直线关系。; 血清总补体溶血活性测定 以溶血百分率为纵坐标，相应补体血清量为横坐标，在一个稳定体系中，溶血程度与补体剂量呈一种特殊“S”形曲线。曲线在30%-70%之间最陡几乎呈直线，补体剂量少许变化，溶血程度会发生很大改变，曲线此阶段对补体量变化非常敏感，所以试验常以50%溶血作为终点指标，该试验即为50%补体溶血试验。;补体介导溶解技术; 试验方法 1、绵羊红细胞　抽绵羊全血→去纤维→用NS洗涤三次→用缓冲液配制成2%备用。; 绵羊红细胞制备法;2、溶血素　即抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫家兔而得到兔血清。但试验前应进行加热56℃30min以灭活补体。 （1）溶血素稀释　根据需要对其进行稀释。补体活性测定一般使用2U(1：2000) ;;溶血素效价与单位确定： 　　以产生完全溶血最高稀释管为最大有效反应管，以该管中所含溶血素量为1U/ml,以该管溶血素稀释倍数为溶血素效价。如上表中溶血素效价应为 1：4000。;3、稀释缓冲液：PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液或巴比妥缓冲液加NaCl以保持等渗，加适量活化补???不可少Ca2+与Mg2+ 4、补体：　取新鲜血清标本，1：20稀释血清。 ;5、50%溶血标准管 取2%SRBC悬液0.25ml加蒸馏水1ml，SRBC全部溶解，为100%全溶血。再加1.8%NaCL1mL,最后加2%SRBC悬液0.25ml混匀，即为50%溶血标准管。;试验方法;;;;50%溶血标准管; 取试管10支，分别编号1、2、3……10，按下表加入物质： CH50测定操作表 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1：20血清ml 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 -- BB液 ml 1.4 1.35 1.3 1.25 1.2 1.15 1.1 1.05 1.0 1.5 溶血素ml（2U/ml） 每管加入0.5 2%SRBCml 每管加入0.5 摇匀、37℃水浴30min，取出离心2500r/min×5min ;;按下列公式求50%溶血总补体值 CH50（U/ml）＝; 方法学评价 　　 CH50试验测定经典途径总补体溶血活性，所反应是补体9种成分综合水平。 本法敏感性较低，补体溶血活性除与试验中反应体积有关外，还与反应所用缓冲液PH、离子强度、钙镁浓度、SRBC数量与反应温度有一定关系故实验时对反应各个环节应严格控制，统一步骤。 ;;临床意义;思考题;谢谢！;