溶血素含量检测.docVIP

实验 小鼠血清溶血素含量测定 一、血清溶血素（抗体）分光光度检测法 【实验原理】 抗原（绵羊红细胞，即SRBC）进入机体，刺激机体产生特异性抗体（溶血素，即抗SRBC抗体）；抗原抗体在体内外结合形成抗原抗体复合物，暴露出补体的C1q结合点，激活补体，导致绵羊红细胞溶解。通过检查机体产生抗体的量，反映机体的免疫功能状态。 【实验目的】 掌握血清抗体（溶血素）含量的测定方法。 【试剂与器材】 1．小鼠，绵羊红细胞，补体； 2．都氏试剂或蒸馏水； 3．试管，吸管，钳子，镊子，微量加样器，水浴箱，分光光度计（540nm）。 【操作方法】 1．把SRBC用生理盐水洗3次（1000～2000转/分，5分钟），弃上清，3﹕5（V/V）用生理盐水稀释SRBC浓度约为20亿个/ml。 2．实验前4天，每鼠腹腔注射SRBC0.2ml； 3．免疫4天后取血，分离血清； 4．用生理盐水适当稀释血清（200倍左右）； 5．取1ml稀释后的血清加入反应管，再加0.5ml10%SRBC，置冰浴中，每管加入1ml补体； 6．将反应管移至37℃水浴中，10 7．2000转/分离心10分钟，再取上清1ml，加入3ml都氏试剂（或蒸馏水）混匀，10分钟后用分光光度计（540mn）测定吸光度； 8．另取一试管作测定实验用的SRBC半数溶血时的吸光度值。取同实验用的10%SRBC0.25ml，加4ml都氏试剂，摇匀，