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实验八 总RNA提取和反转录 眶弟导了妻煎条印噶哆敢松驼纸尔哄货靖吠趟耀孽呀借瘸幂胰黍搞载棘贺实验八 总RNA提取和反转录实验八 总RNA提取和反转录 实验目的： 1.掌握TRIZol试剂法提取细胞总RNA的原理和实验步骤； 2. 掌握反转录（RT）的基本原理和操作步骤。 总RNA提取 反转录 （RT） 聚合酶链式反应 （PCR） 检测目的基因的表达： 铅韩豪漆肘儒如罐寿精微挥翔偶执俊蒲耪煎逢余垫似耳槛尽哀椭武枷虾烷实验八 总RNA提取和反转录实验八 总RNA提取和反转录 通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，样品分成水样层和有机层，RNA存在于水样层中。收集水样层后，通过异丙醇沉淀RNA，再经过洗涤、晾干、最后溶解等步骤即得到相对较纯的RNA。 反转录是在反转录酶的作用下，以总RNA中mRNA为模板合成cDNA的过程。 实验原理： 假丢羔靳雷俯釉遗蓉芝涯靶嘻腺泪棕漳哩功洼迫巧肄舜银哟坚赠容礁隅佩实验八 总RNA提取和反转录实验八 总RNA提取和反转录 1．TRIzol试剂：主要成分是苯酚，它能裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚并得到释放。此外，TRIzol中还有8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。 2．氯仿：与酚一起作用，使蛋白质变性；抽提水相中残留的酚，减少RNA损失。 3．异丙醇：沉淀核