《兽医免疫学》第4章抗原.ppt

第七节 抗原制备技术 一、菌体抗原的制备 1 菌液的培养 2 PBS洗涤 3 抗原染色及单位滴定（诊断抗原） 4 抗原+佐剂（免疫原） 二、病毒类抗原制备 1 病毒的培养 （1）细胞培养病毒 （2）禽胚培养病毒 （3）从动物组织中提取病毒 2 病毒纯化 （1）8-10%PEG浓缩 （2）盐析 （3）超速离心 后进行分子筛分离 三、蛋白质抗原制备 1 基因表达制备抗原 2 亲和层析分离抗原 3 盐析分离抗原 四、细胞抗原的制备 1 培养细胞，胰酶消化 2 PBS洗涤、离心 3 细胞计数 五、免疫原的制备 1 抗原+等量弗氏完全佐剂（或不完全佐剂） 2 抗原+10%铝胶（颗粒性抗原） 3 1份抗原+3份白油佐剂 白油佐剂的制备 油相： 1份10号工业白油+6%司本80+2%硬酯酸铝 水相：1份抗原+2%土温80 六、免疫程序的制定 通常根据抗原的性质、被免疫的对象等来决定 对于免疫原性强的抗原，一般免疫2-3次； 对于免疫原性稍弱的抗原，一般免疫3-4次； 较弱的抗原一般免疫5次以上。 初次与第二次免疫一般间隔1个月，第二次免疫 与第三次免疫间隔15天或1个月，第三次与第四 次间隔15或7天。 第一节 抗原的概念 抗原（antigen ,Ag）是能刺激机体产生抗体和效应淋巴细胞，并能与之结合引起特异性结合反应的物质 第4章 抗 原Antigen 免疫原性（immunogenicity）即抗原能刺激特定的免疫细胞，使 之活化、增殖、分化和产生免疫效应物质（抗体和效应淋巴细胞）的特性 免疫反应性（immunoreactivity）即抗原能与相应的免疫效应特质（抗体和效应淋巴细胞）特异性结合，产生免疫反应的特征 抗原的抗原性 完全抗原（complete antigen)： 既有免疫原性又有反应原性的抗原 免疫原（immunogen）：在具有免疫应答能力的机体中，能使机体 产生免疫应答的物质。 半抗原（hapten）： 没有免疫原性，只有免疫反应性的抗原 半抗原+载体=全抗原（见图示） 简单半抗原（simple hapten) 复合半抗原（complex hapten) 完全抗原与半抗原 免疫耐受（immune tolerance） 在某些情况下，抗原也可以表现为特异性的负免疫应答， 超敏反应（hypersensitivity） 抗原还可能引起病理性的免疫应答 第二节 影响抗原分子免疫原性的因素 一 异源性（foreigness) 异物性是指抗原与自身成分相异或从未与宿主免疫细胞接触过的物质。 二 理化性状 分子量大小 ：分子量越大，免疫原性越好 化学结构的复杂性：抗原必须有较复杂的化学结构 立体构象（conformation）抗原分子中一些特殊化学基团的三维结构，是决定此分子是否能与相应淋巴细胞表面受体结合，从而启动免疫应答的物质基础 易接近性（accessibility）是指抗原表面这些特殊的化学基团与淋巴细胞表面相应受体相互接触的难易程度，易接近性常与这些化学基团在抗 原分子中分布的部位有关。 物理状态 四 机体因素 决定某一物质是否具有免疫原性，除与上述条件有关外，还受机体的遗传、年龄、生理状态、个性差异等诸多因素的影响。此外，抗原进入机体的方式和途径也与免疫原性的强弱有关。 三 对抗原加工和递呈的易感性 具有免疫原性的物质须经非消化道途径进入机体，被抗原递呈细胞加工和递呈并与接触免疫活性细胞，才能成为良好的抗原。 五 免疫方法 免疫抗原的剂量、接种途径、接种次数及免疫佐剂的选择。 第三节 抗原的特异性与交叉反应 抗原的特异性是指某一抗原分子只能诱导相应淋巴细胞发生免疫应答的专一性，以及某一抗原分子只能与相应抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的专一性。 一、 抗原表位（antigen epitope): 又称抗原决定簇（antigen determinant)是存在于抗原分子的表面具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团。 二、表位的大小 一般为50～70nm，3nm3。它一般由5~8个氨基酸残基、葡萄糖残基组成。通常一个抗原性物质含有多个抗原决定簇 三、表位的数量 抗原价（antigen valence)： 抗原分子抗原表位的数目。 多价抗原（multivalent antigen) 单价抗原（monovalent antigen) 单特异性表位（monospecific epitope) 多特异性表位（multispecific epitope) 功能性表位，隐蔽性表位 四、构象表位和顺序表位 构象表位(conformat