《兽医免疫学》第8章血清学反应.ppt

“ ” “ ” 第八章 血清学反应 第一节　血清学反应概述 抗原与相应抗相遇可发生特异性结合，并在外界条件的作用下出现某种反应，如凝集或沉淀，藉此可用已知抗原（或抗体）检测未知抗体（或抗原）。因抗体主要存在于血清中，又称为血清学反应（serological reaction) 一、免疫血清学技术的类型 按抗原抗体反应性质不同，可分为凝 集性反应、标记抗体技术、有补体参与的 反应、中和反应以及电免疫反应、免疫转 印、蛋白质芯片等技术。 1 凝集试验 直接凝集试验、间接凝 集试验、乳胶凝集试验 2 沉淀试验 环状沉淀试验、絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫电泳 3 补体参与的试验 补体结合试验 4 标记抗体技术 荧光抗体技术、酶标抗体技术、放射免疫测定、化学发光标记技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术 5 中和试验 病毒中和试验 6 电免疫反应 免疫传感器技术 7 免疫芯片技术 蛋白质芯片技术 二、血清学反应的特点 1、抗原抗体结合的特异性与交叉性 　 血清学反应具有高度的特异性，如猪瘟病毒的抗体只与猪瘟病毒结合。 同一抗原分子可具有多种不同的抗原表位，若两种不同的抗原具有一个或多个相同（相似）的抗原表位，在与相应抗体反应时可出现交叉反应（cross reacion) 2、抗原抗体结合的可逆性 抗原与抗体的结合为弱能量的共价结合，其结合力取决于抗体的抗原结合位点与抗原表位之间形成的共价键的数量、性质和距离，由此可分为高亲和力、中亲和力和低亲和力抗体。抗原抗体结合是分子表面的结合，该过程受物理、化学和热力学的法则所制约，结合温度在0~40℃，pH在4~9。如温度超过60或pH在3以下，则可解离。 等价带表示抗原与抗体比例最合适，形成大而多的结合物，此时在反应体系中测不出或有极少游离的抗原或抗体；抗体过剩带（前带）和抗原过剩带（后带）皆表示抗原与抗体的比例不合适，所形成的结合物少且小，在反应体系中存在着较多的游离抗原或抗体 3、抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性 4、抗原抗体反应的阶段性 第一阶段是抗原抗体的特异结合，此阶段仅需几秒到几分钟，尚无可见反应 第二阶段为可见反应阶段，需数分钟、数小时乃至数日，受各种因素影响 三、抗原抗体反应的主要影响因素 1、抗原和抗体浓度、比例抗原和抗体浓度、比例对抗原抗体反应影响最大、是决定性因素，如前所述。 2、电解质 3、温度 4、酸碱度 四 血清学技术的应用 一、动物疫病诊断 二、动植物体内生理活性物质研究 三、物种及微生物鉴定 四、生物制品研究 五、动物疫病致病机理研究 六、分子生物学研究 第二节 凝集反应 （agglutination） (动画演示) 　　凝集试验是指颗粒性抗原（细菌、细胞等） 与相应的抗体，或可溶性抗原（亦可用抗体） 吸附于与免疫无关的载体，形成致敏颗粒（免 疫微球）与相应的抗体（或抗原），在有合适 的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集小块 。 一、直接凝集试验(direct agglutination test) 颗粒性抗原与相应抗体直接结合，并出现凝 集现象的试验，称直接凝集试验。按操作方法， 分为玻片法和试管法两种。 1 玻片法 为一种定性试验。是将含有已知抗体的诊断 血清（适当稀释）与待检菌悬液各一滴在玻片上混合，数分钟后，出现颗粒状凝集。方便快速，用于细菌的鉴定或分型。 2 试管法 为一种半定量试验。用以检测待检血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的效价。可作为临床诊断或流行病学调查。操作时将待检血清进行倍比稀释，然后加入等量抗原，37℃水浴数小时，观察凝集程度。 二 间接凝集试验 （INDIRCT AGGLUTINATION） 可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的不溶性颗粒表面，然后与相应的抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，出现特异性的凝集反应。 常用的载体有红细胞、乳胶、炭粉、离子交换树脂等。可溶性抗原为细菌的裂解物或浸出液、病毒、寄生虫分泌物或裂解物、各种蛋白等。 1 间接血凝试验 (indirect hemagglutination test) 亦称为被动血凝试验，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体。 如用抗体致敏于红细胞表面，用以检测相应抗原，称反向间接血凝试验（reverse passive hemagglutination test). 2 乳胶凝集试验 （Latex agglutination te