染色体G显带技术及其原理共46页文档.ppt

( 二 ) 胰蛋白酶－ EDTA 法 1. 将 25ml 生理盐水和 25ml 0.02íTA 溶液倒 入立式染色缸内。 2. 取 2.5% 胰蛋白酶溶液 l ml 加入上液内混匀， 滴入 1 ～ 2 滴 1 M 氢氧化钠溶液至上液中，使 pH 达 7.0 ～ 7.2 。 3. 将配制好的胰蛋白酶溶液置 37 ℃水浴箱中 预热 5 分钟。 ( 二 ) 胰蛋白酶－ EDTA 法 4. 取染色体标本片，置入胰蛋白酶溶液中，轻 轻摇动 60 ～ 180 秒。 立即在生理盐水中漂洗 两次。 5. 以 Giemsa 染色 5 ～ 10 分钟（ 37 ℃）后，用自 来水冲洗、晾干。 ( 二 ) 胰蛋白酶－ EDTA 法 6. 镜检判断显带效果，在低倍镜下选择分散良 好，长度适中的分裂相，再转至油镜下观察。 若染色体边缘发毛，为显带过度；若染色体 未出现带纹，则为显带不足。这时应根据具 体情况再试一张标本片，适当增减胰蛋白酶 处理的时间，直到满意为止。 ( 三 ) ＡＳＧ (Acetic-saline-Giemsa) 法 1 ．用甲醇、冰醋酸固定液固定，空气干燥法制 片的标本。 2 ．浸入 2 × SSC 溶液中， 60 ℃温育 1 小时。 3 ．蒸馏水冲洗。 4 ． 1/20 Giemsa 染液染色 1 小时。 5 ．水洗后凉干镜检。 染色体 G 显带技术 及其原理 染色体 G 显带核型图 实验原理 (1) 人们将用各种不同的方法，以及用不同 的染料处理染色体标本后，使每条染色体上 出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为 显带技术 （ banding technique ）。本世纪 70 年代以来，显带技术得到了很大发展，且在 众多的显带技术中（ Q 带、 G 带、 C 带、 R 带、 T 带）， G 带是目前被广泛应用的一种带型。 因为它主要是被 Giemsa 染料染色后而显带， 故称之为 G 显带技术 ，其所显示的带纹分布在 整个染色体上。 实验原理 (2) 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、 Na0H 、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用 Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅 交替的横纹，这就是染色体的 G 带。每条染色 体都有其较为恒定的带纹特征，所以 G 显带后， 可以较为准确的识别每条染色体，并可发现 染色体上较细微的结构畸变。 Giemsa 染料的发明者 :Gustav Giemsa 实验原理 (3) 关于 G 显带的机理目前有多种说法，例如， Lee 等（ 1973 ）认为染色体上与 DNA 结合疏松 的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些 区段成为浅带，而那些组蛋白和 DNA 结合牢 固的区段可被染成深带。 实验原理 (4) 有人认为，染色体显带现象是染色体本 身存在着带的结构。比如用相差显微镜观察 未染色的染色体时，就能直接观察到带的存 在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则 带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带 特点也不一样，说明带的出现又与染料特异 结合有关。 实验原理 (5) 一般认为，易着色的阳性 带为含有 AT 多的染色体节段， 相反，含 GC 多的染色体段则 不易着色。显带方法的分子学 基础涉及核苷酸碱基组成、相 关蛋白和基因组功能结构。一 般而言，吉姆萨阳性显带（ G 深带， R 浅带）富含 AT ，复制 较迟，基因较少；吉姆萨阴性 显带（ G 浅带， R 深带）富含 GC ，复制较早，基因较多； 总的来说， G 显带的机理还未 搞清。 DNA 核苷酸的组成 实验原理 (6) 非显带的标本上虽然可以根据染色体的 形态识别 1 ， 2 ， 3 ， 16 ， 17 和 18 号，有时还 可以识别 Y 染色体，但却不能有把握地鉴别其 他大多数染色体。自 1970 年 Caspersson 等首 次报道用喹吖因对人体染色体进行染色可在 各号染色体上显现出宽窄和位置不同带纹以 来，细胞遗传学工作者以不同的染色方法为 基础，提出了各种显带方法的名称。 实验原理 (7) 如用芥子喹吖因作为染料 , 染出的荧光带称为 Q 带 , 其方法称为 Q 显带法 ; 用 Giemsa 作为染料 , 染出的 带称为 G 带 , 其方法称为 G 显带法。同样用 Giemsa 或 其他荧光染料作为染料，但在其中加上不同的预处 理而获得的与 Q 带或