化妆品中细菌菌落总数检查.ppt

化妆品中细菌菌落总数检查 前言 随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们 日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质 量监测。是保障人民健康维护消费者的利 益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会 导致皮肤感染 。因此，化妆品细菌总数测 定是便于判明样品被污染的程度。是对样 品进行卫生学评价的重要依据 。 ? 菌落总数是指化妆品检样经过处理，并在 一定条件下培养后，得到的 1g 或 1ml 检样中 所含细菌菌落的总数。 ? 菌落总数的测定（平板活菌计数法）是根 据微生物在固体培养基上所形成的菌落 （即由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见 的子细胞群体）的生理及培养特征进行的。 也就是说，一个菌落即代表一个单细胞。 一、实验原理 ? 测定时，首先将待测样品制成均匀的、一系列 不同稀释度的稀释液，并尽量使样品中的微生物 细胞分散，使之成为单个细胞状态存在（否则 1 个 菌落就不能代表 1 个菌）；再取一定稀释倍数的一 定量稀释液接种到培养基上，使其均匀分布。菌 落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落 的数目，可计算样品中的含菌数。 ? 由于所计算出的菌数是培养基上长出来的菌落 数，故不包括死菌，因此菌落总数的测定又称为 活菌计数。 ? 菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志， 也可用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便在 对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 ? 前边所述的细菌菌落总数实际上仅为样品中总 细菌数的一部分，其余细菌皆因种种原因未能长 出。每种细菌都有其一定的生理特性，欲将各种 细菌都有培养出来，就必须创造各种不同的培养 条件，包括营养、温度、 pH 、需氧性等，去满足 各种细菌的要求。在实际工作中，不可能也不必 要培养出所有的细菌，所得结果只是能在肉汁营 养琼脂上生长的嗜中温需氧性的菌落总数。 二、仪器设备 （ 1 ）培养箱：（ 36 ± 1 ）℃。 （ 2 ）恒温水浴锅：（ 46 ± 1 ）℃。 （ 3 ）天平。 （ 4 ）灭菌广口瓶或三角瓶： 500ml 。 （ 5 ）灭菌培养皿：皿底直径 9.0 ㎝。 （ 6 ）灭菌吸管： 1.0 ㎝、 10.1 ㎝。 （ 7 ）灭菌小试管。 （ 8 ）玻璃珠：直径 5 ㎜。 （ 9 ）均质机。 （ 10 ）灭菌刀、剪刀、镊子。 （ 11 ）酒精灯。 三、培养基和试剂 ? (1) 营养琼脂培养基 ? 成分： ? 蛋白胨 10g 琼脂 15 ～ 20g ? 牛肉膏 3g 蒸馏水 1000mL ? 氯化钠 5g pH 7.2 ～ 7.4 ? 制法：将除琼脂以外的各成分溶于蒸馏水中，用 15% 的 NaOHt 调节 pH 使之在 7.2 ～ 7.4 。加入琼脂，于 121 ℃下 高压灭菌 15min ? (2) 生理盐水 ? 成分： ? NaCl 0.9g 蒸馏水 100ml ? 制法：一般每种检样配制 250ml 无菌生理盐水。 称取 2.2gNaCl, 加入 250ml 蒸馏水溶解；分装于 2 支大试管中，每支 9ml; 再量取 225ml 装于 500ml 广口瓶或三角瓶中，并加入适量的玻璃珠；剩余 的装入另 1 支试管中，包扎后于 121 ℃下高压灭菌 15min 。 ? (3) 75 ﹪的酒精棉球。 四、实验步骤 1. 菌落总数的检验程序（图 1 ） 检样 ↓ 制成几个适当倍数的稀释度 ↓ 选择 2 ～ 3 个适宜的稀释度，个取 1ml 加入灭菌培养皿 ↓ 每皿内各加入适量的营养琼脂 (36 ± 1) ℃ ↓ 菌落计数 ↓ 报告 图 1 菌落总数的检验程序 操作步骤 ? 1 、培养基的制备 ? （ 1 ）根据检测样品量，计算所需营养琼脂 培养基和生理盐水的用量，然后按照上述 方法配制好备用。 ? （ 2 ）检样的稀释、分装（图 2 ）及培养 实验步骤 ? 在无菌条件下，将 25ml( 或 25g) 检样剪碎