Heparin层析填料说明书.docVIP

Heparin Sepharose 6 Fast Flow 原理 肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖,将它偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的物理化学稳定性。肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合,所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。 *图为含有交互转换的抗坏血酸的肝磷脂多糖的结构(A和D-葡萄糖残基(B 分离操作 结合缓冲液:20mM Tris-HCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠, pH7.0 洗脱缓冲液:20mM Tris-HCl, 1~2M NaCl, pH 8.0或者10mM 磷酸钠,1~2M NaCl, pH7.0 1,用10倍柱体积的结合缓冲液平衡柱子。 2,上样。 3,用5-10倍柱体积的结合缓冲液平衡分离柱,直到基线,即所有未结合物质都被冲洗出柱子。紫外吸光A280nm处监测。 4,用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液进行洗脱。使用连续的或者阶梯式的梯度洗脱,洗脱缓冲液的浓度从0%-100%。 使用注意 1,通过改变缓冲液的pH值或者离子强度来修饰肝磷脂的选择性。洗脱时使用连续的或者阶梯式的洗脱方式,用NaCl,KCl或者硫酸铵溶液,浓度可以高达1.5~2M。 2,对于凝血因子而言,肝磷脂作为亲和配基,在结合缓冲液中含有一个低浓度的0.1M的NaCl是合适的。 3