腺病毒表达系统.pptVIP

宿主的免疫反应仍然是获得转基因长期表达和重复使用 腺病毒载体的主要障碍。大量研究已证实 , 具有感染性的腺病 毒载体本身就足以引起免疫反应。 更为“复杂”的腺病毒载体就是第三代腺病毒载体 , 在其 构建时去除了某些病毒基因 , 甚至是去除了全部的病毒基因。 所谓的“空壳”载体起先只保留了 ＩＴＲ和包装信号 , 且在 产 生中需要辅助病毒和合适的互补包装细胞 , 更需要进一步的纯 化。 第三代腺病毒载体 第三代新型重组腺病毒载体删除病毒基因中所有开 放阅读框 , 仅含有必要的顺式元件 ( 即 ITR 和邻近的 包装信号序列 ) , 需要在辅助病毒存在情况下 , 在包 装细胞中繁殖 , 其安全性很高。 第三代腺病毒载体不但可容纳较大的外源基因 (32kb) , 而且较容易获得高滴度 ( 10 9 pfu /ml) 。 第三代新型重组腺病毒载体 ? 腺病毒在寄主细胞中呈游离 态，基因瞬时表达 ? 可侵染处于分裂期或非分裂 期的寄主细胞 ? 高水平的蛋白质表达 ? 双载体系统的操作 ? 病毒的效价可达 10 12 pfu/ml ? 平均可插入 8kb 的外源片段 ? 长期、稳定的基因表达，可 以遗传 ? 只能侵染分裂期的寄主细胞 ? 中度的蛋白表达水平 ? 单一载体操作 ? 病毒效价达 10