低温诱导植物染色体数目的变化.docVIP

低温诱导植物染色体数目的变化 一、实验教学目标 1. 知识目标：理解低温诱导植物细胞染色体数目变化的作用机制。 2. 能力目标：学会低温诱导植物染色体数目变化的方法。 3. 情感态度价值观：体会实验结果带来的成就感，感受团队合作的快乐。 实验原理 进行正常有丝分裂的植物分生组织细胞，在有丝分裂后期，染色体的着丝点分裂，子染色体在纺锤丝的作用下，分别移向两极，最终被平均分配到两个子细胞中去。 用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，以致影响染色体被拉向两极，使细胞也不能分裂成两个子细胞。结果，植物细胞染色体数目发生变化。 三、实验仪器材料 洋葱或大葱、蒜、培养皿、滤纸、纱布、烧杯、镊子、剪刀、显微镜、载玻片、盖玻片、冰箱、卡诺氏液、改良苯酚品红染液、体积分数为15%的盐酸溶液、体积分数为95%的酒精溶液。 实验方法 1. 培养根尖：将洋葱放在装满清水的广口瓶，让洋葱的底部接触水面。 2. 低温诱导：待洋葱长出1cm左右的不定根时，将整个装置放入冰箱的低温室（4℃）内，诱导培养36小时。 3. 固定细胞形态：剪去诱导处理的根尖约0.5-1cm，放入卡诺氏液中浸泡0.5-1小时，以固定细胞的形态，然后用体积分数约95％的酒精冲洗2次。 4. 制作装片：取固定好的根尖，进行解离；漂洗；染色；制片4个步骤，具体操作方法与“观察植物细胞的有丝分裂”实验相同。 5. 观察装片：先用低倍镜寻找染色体形态较好的分裂相。视野中既有正常的二倍体细胞，也有染色体数目发生改变的细胞，发生染色体数目变化的细胞中染色体数目可能为正常细胞的两倍。确认某个细胞发生染色体数目变化后、再用高倍镜观察。 6.记录结果：对看到的发生染色体数目加倍的细胞拍照记录。 试剂及用途： (1) 卡诺氏液：固定细胞形态。 (2) 95%酒精：冲洗附着在根尖表面的卡诺氏液。 (3) 解离液：(质量分数为15%HCI和体积分数为95%酒精1:1混合)使组织中的细胞分离开。 (4) 清水：洗去解离液，防止解离过度，便于染色。 (5) 改良苯酚品红染液：使染色体着色。 五、实验数据的采集分析 （一）学生观察到的较好的实验结果后，由老师拍照记录。 （二）造成看不到染色体数加倍细胞原因较多，常见原因有：1. 没有培养出分生区或没有剪取到分生区2. 低温诱导时间不足3. 解离不充分或漂洗不干净造成染色不足4. 染色时间控制不当，看不清染色体5. 没有低倍镜寻找过程六、实验总结反思与修正 1. 针对新洋葱不容易生根的问题，解决方法为：先将新洋葱放在干燥、通风、阳光下晒10天左右，再放入冰箱中低温室内（4℃左右均可）3-5天左右，可以解除休眠，就很容易发根了。 2. 针对剪取根尖时，很多根尖已经被上一个班级的同学剪掉，导致实验失败的问题，解决方法为：每次剪取根尖时先把根从基部剪掉，然后剪取上面的根尖，这样，就可以避免以上问题的出现。 3．针对调整解离时间和解离方式的问题。解决方法为： 解离时间少于5分钟解离效果不太好，在制作装片时细胞分散效果不好。解离时将根尖放在培养皿的边上，倾斜放置培养皿，滴加1毫升的解离液解离即可，这样用量少，既节约又更加安全。或者在酒精灯火焰上稍微加热，可以节省解离的时间。 4. 针对染色液的浓度和染色时间的问题，解决方法为：将初始染液稀释10倍，并且染色时间为3分钟，效果最好。如果染色液不稀释，就会把染色体染色太深，以至于在显微镜下观察时，看到的是深蓝的一片，很难分辨一条条的染色体。将染液稀释10倍，并且染色时间减少为3分钟，染色清晰、而且时间长也不影响染色效果。 5. 压片方法可以改为：将载玻片放在书本上或桌面上，直接用镊子顶端轻轻敲砸盖玻片，使细胞进一步分散开，效果更好，再用吸水纸把周围多余的水吸掉，即可观察。