sop细菌内毒素检查操作规程.pdfVIP

颁发部门 接收部门 细菌内毒素检验操作规程 生效日期 操作标准质量 制定人 制定日期 文件编号 审核人 审核日期 文件页数 共3 页 批准人 批准日期 分发部门 1 目的 规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。 2 范围 适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。 3 责任 化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。 4 内容 本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌 内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 4.1 仪器、用具 4.1.1 旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6 号、9 号）、保鲜纸、试 管（10×75 mm ）、镊子（金属）、金属盒。 4.1.2 用具除去外源性内毒素： 将用具放入金属盒，在250℃干烤30 分钟或180℃干烤120 分钟。 4.2 试剂 4.2.1 细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、 仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 4.2.2 细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应 不小于2EU，不大于50EU 。 4.2.3 细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为 0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂 在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。 4.2.4 鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml ）。 4.3 鲎试剂灵敏度复核试验 第2 页/共3 页 鲎试剂灵敏度的标示值 （λ ，此处λ =0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品 用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合 15 分钟，然后制备成合适的稀 释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡 混合器上混合30 秒钟。按检查法项下试验，每一浓度平行做4 支，同时用细菌 内毒素检查用水做2 支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴 性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λ c。 -1 λ c=lg (∑X/4) 式中X 为反应终点浓度的对数值(lg)。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶 液中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λ c 在0.5λ ～2.0λ （包括0.5λ 和2.0λ ）时，方可用于细菌内毒素检 查，并以λ 为该批鲎试剂的灵敏度。每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏 度的复核。 4.4 供试品干扰试验 按鲎试剂灵敏度复核试验项下，用细菌内毒素检查用水和供试品的最大有效 稀释倍数（MVD）稀释液分别将同一支（瓶）细菌内毒素工作标准品制成含细 菌内毒素工作标准品2.0λ 、1.0λ 、0.5λ 和0.25λ 四种浓度的内毒素溶液。用 细菌内毒素检查用水和用供试品稀释液制成的每一浓度平行做4 支，另取细菌内 毒素检查用水和供试品稀释液各做2 支阴性对照管。如最大浓度2.0λ 管均为阳 性，最低浓度 0.25λ 管均为阴性，阴性对照管均为阴性时，按下式计算用细菌 内毒素检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（Es）和用 供试品稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（Et）。 -1 Es= lg (∑Xs/4) -1 Et= lg (∑Xt/4) 式