完整版Sanger测序流程.doc

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2020-07-03 发布于天津
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测序一原理法测序是利用一种聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物直到掺入一种链终止核苷酸为止每一次序列测定由一套四个单独的反应构成每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸由于缺乏延伸所需要的基团使延长的寡聚核苷酸选择性地在或处终止并且在每个碱基后面进行荧光标记产生以结束的四组不同长度的一系列核苷酸然后在尿素变性的胶上电泳进行检测从而获得可见的碱基序列测序仪是高质量的长片段读取和序列分析的测序平台应用灵活而广泛可同时分析个样品该仪器采用色荧光同时检测可不间断小时运

Sanger测序一、原理 Sanger法测序是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得可见的DNA碱基序列。 ABI 3730XL测序仪是高质量的长片段读取和序列分析