手足口病实验室检测方案设计.pdf

实用标准文案 手足口病实验室检测方案 为规范手足口病的标本采集、运送及实验室检测操作程序，提高检测准确性，从而为手 足口病的明确诊断和相关实验研究提供可靠的依据，特制定本方案。 手足口病的实验室检测原则和程序 手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本后进行病毒分离和病毒鉴定，如果没有 采到合适的临床标本，或无法进行病毒分离，也可以通过血清学检测（如中和实验）来检测 血清中的中和抗体，或直接从临床标本中检测病毒的核酸来诊断（见下图：手足口病的实验 室诊断流程图）。 一般是由省级病毒实验室进行病毒的分离，爆发疫情范围较大时，国家参比实验室也可 以提供技术支持。病毒分离成功后，送至国家参比实验室进行鉴定或复核，同时对全国手足 口病的病原进行病毒学监测。 国家参比实验室接到标本后， 在 30 日内将结果反馈给省级实验 室。 很多血清型的肠道病毒能引起手足口病， 不同细胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的， 而不同时期肠道病毒的流行株也不同。通常用于肠道病毒分离的细胞系为 RD细胞（对 CA16 和 EV71敏感）、HEp-2 细胞（对某些柯萨奇 B 组病毒敏感）等，联合使用上述两种或更多细 胞（如 Vero 细胞）有助于分离到更多的肠道病毒。 使用血清型特异性的中和抗血清进行的中和实验是肠道病毒鉴定的基本方法，如果使用 了适当的抗血清，实验结果是比较可靠的。因为肠道病毒包括若干个血清型，通常使用组合 抗血清进行鉴定，有些组合抗血清已经商品化。 当无法进行病毒分离或得不到适用于病毒分离用的标本时，血清学检测可以为肠道病毒 的感染提供一个间接的证据。一般用急性期血清与恢复期血清的检测结果进行比较，抗体滴 度呈四倍或以上增高证明有急性感染。但是，无症状的肠道病毒感染也是常见的，所以对检 测结果的解释要慎重一些。 为了提高检测速度，也为了辅助中和实验法进行毒株鉴定，最近很多实验室都使用分子 生物学方法。目前，用分子生物学方法对肠道病毒进行定型还没有统一的标准，而且要根据 检测目的选择使用适用的方法。 文档大全 实用标准文案 检测结果的评价 如果从临床标本中分离到肠道病毒，尤其是分离自脑脊液、疱疹液，那么很可能该病毒 就是病因病原。当无法进行病毒分离或未分离到病毒时，血清学诊断方法可以作为病毒感染 的间接证据。对于难以分离到的肠道病毒，分子生物学方法如 RT-PCR是很有用的。肠道病毒 有时引起无症状感染，所以实验结果的实际意义应结合临床过程和流行病学资料进行解释。 实验室诊断标准 根据手、足、口等部位典型皮疹即可作出 HFMD临床诊断，流行病学接触史有助于诊断， 临床诊断病例中符合下列之一，即为实验室诊断病例： 1，患者的粪便标本、咽拭子标本中病毒分离阳性率远高于对照人群； 2，肠道病毒型特异性中和抗体滴度≥ 1 ∶256；或恢复期血清中肠道病毒型特异性中和抗 体较急性期有 4 倍或 4 倍以上增高； 3，在病变组织中如疱疹液或脑脊液中分离到病毒； 4 ，自患者血清、疱疹液或脑脊液等标本中检测到病原体核酸。 文档大全 实用标准文案 一、标本采集对象 标本采集对象是暴发疫情出现时手足口病的临床诊断病例和病例发病所在社区（村）的 临近无病例的社区（村）或托幼机构的 5 岁以下的儿童（作为健康对照人群） 。 用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子和疱疹液，如果患者出现神经系统症状，可以采 集脑脊液标本。对于血清学诊断，需要在急性期和恢复期采集双份血清标本。临床标本在运 输和贮存过程中要避免反复冻融，如果不能确保 - 20℃的条件，应该在 0~8℃运输和保存。标 本应冷冻运输，运输时要附有必要的信息，如标本编号、发病日期和标本采集日期。 二、标本种类及采集、运送 （一）粪便标本 采集病人发病 7 日内的粪便标本，用于病原检测。粪便标本采集