水质急性毒性的测定发光细菌法.ppt

中华人民共和国国家标准水质急性毒性的测定发光细菌法“GB/T 15441-199507水产姚敏杰 张鉴浙 俞林峰 适用范围： 本标 准 适 用于工业废水、纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质急性毒性监测。 原理 实验试剂和仪器 实验步骤 计算 实验原理 发 光 细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关，因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度，以此表示其急性毒性水平。 实验试剂与仪器 1.试剂： 氯化汞Hgcl2,氯化钠NaCl,明亮发光杆菌T3小种冻干粉,氯化钠溶液(3 g/100 lm),氯化钠溶液(2 g/100 ml),参比毒物氯化汞标准溶液(0.0 2 ,0. 04,0.06,0.08,0.10 ,0.12,0.14 ,0.1 6,0.18 ,0.20,0.22,0.24m g/L),氯化汞母液,p=2 000 mg/L,氯化汞工作液(p=2 mg/L) 2.仪器： 生物发光光度计，2 ml或5 ml测试样品管， 微量注射器:10ul 注射器:1 ml, 定量加液瓶:5 MI. 吸管:2,10,25 ml, 试剂瓶;100m l, 量筒:100,500 ml, 棕色容量瓶:50,250,1 000 ml, 半微量滴定管(配磨口试液瓶，全套仪器均为棕色),10 MI. 实验步骤 1.样品处理 样品的采集和保存 样品液的稀释：样品液预试验取事先加氯化钠至3 g/100 ml浓度的样品母液2 ml装入样品管，并设一支CK管(氯化钠3 g/100 ml溶液)，测定相对发光度，分两类情况：1，相对发光度低于50%乃至零，欲以EC50表达结果，则须稀释；2，，相对发光度在1%以上，欲以与相对发光度相当的氯化汞浓度表达结果，则不须稀释。 样品稀释 探测实验： 按对 数 系 列将样品液稀释成5个浓度:100%,10%，1%，O.1 %,0.01 粗测一遍看1%一100%相对发光度落在哪一浓度范围。 在 1 % -100%相对发光度所落在的浓度范围内再增配6-9个浓度(例如，若落在0.1%-10%之 间，则应稀释成。1%,0.25%,0.5%,0.75%,1%,2.5%,5%,7.5%,10%;若落在1%-10%之间，则 应稀释成1%,2 %,4%,6%,8 %,10 %)，再测一遍相对发光度 2.相对发光度测定： 用 5m l 的定量加液瓶给每支CK管加2或5 ml氯化钠3 g/100 ml(据仪器型号而定) 用 2或 5m l吸管给每支样品管加2或5m l样品液 3：发光细菌冻干菌剂复苏 4：仪器的预热和调零 5：仪器检验复苏发光细菌冻干粉质量 6：给各测试管加复苏菌液 7：发光细菌与样品反应达到终止时间的读数 8：有色样品测定干扰的校正 结果计算 计算样品相对发光度(%)，并算出平均值。 符合条件1者，建立并检验氯化汞浓度(C)与其相对发光度(T)%均值的相关方程，也可以绘制关系曲线。 符合条件2者，建立并检验样品稀释浓度(C)与其相对发光度(T)%均值的相关方程，关系曲线。 根据测试结果表达样品急性毒性 符合条件1者，测 试结果报告同时列举样品相对发光度及其相当的氯化汞浓度值。 符合条件2者，测 试 结果报告列举样品的EC50值。 * *