第4章细菌药敏试验及其耐药表型检测 文档资料.ppt

2019/5/9 31 琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128 256 ug/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液， 点种菌， 10 4 / 每个点，孵育，判读结果 2019/5/9 32 琼脂稀释法 ? 优点：金标准 精确可靠 ? 可同时测定多株菌（ 40 株） ? 细菌生长情况可查 ? 缺点： ? 测多个药时劳动强度大 ? 制备平皿费时费力 E test 法 ? E 试条是一条 5mm × 50mm 的无孔试剂载体，一面固 定有一系列预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释抗 菌药物，另一面有读数和判别的刻度； ? 抗菌药物的梯度可覆盖有 20 个 MIC 对倍稀释浓度的 宽度范围； ? 将 E 试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜， 围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交 点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度。 2019/5/9 wanghui-ART 34 E test 法 细菌生长 区 E test 塑料 条 椭圆形 细菌生长 抑制区 256 128 8 016 判读抑菌浓度 （ MIC ug/ml) E test 法 ? 菌液制备及接种均同纸 片扩散法。 ? 90mm 平板上可放 E 试验 试条 1 ～ 2 条， 140mm 平板最多可放 6 条。 ? 孵育温度及时间同纸片 扩散法。 2019/5/9 36 E test 法 ? 优点 ? 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 ? 影响因素少，稳定性高 ? 操作简单，省时 ? 缺点：昂贵 ? 用途：快生长菌，苛养菌，厌氧菌，酵母菌， 分枝杆菌 2019/5/9 37 评价药物体外抗菌活性的指标 ? MIC 50 , MIC 90 , MIC 均值， MIC 范围， R ， I ， S ? MIC 50 / MIC 90 ： MIC 从小到大排列，位于第 50 / 90 百分位菌株的 MIC 值 ? 单纯比较 MIC 50 ， MIC 90 是片面的，还要同时看平均 MIC 及 MIC 范围 ? 同时结合 R ， I ， S ， ( 不同药物血浓度不同，安全范 围不同 ) 细菌耐药机制 ? 细菌耐药机制主要有四种： ? 产生一种或多种水解酶、钝化酶和 修饰酶； ? 抗生素作用的靶位改变，包括青霉 素结合蛋白位点、 DNA 解旋酶、 DNA 拓扑异构酶Ⅳ的改变等； ? 细菌膜的通透性下降，包括细菌生 物被膜的形成和通道蛋白丢失； ? 细菌主动外排系统的过度表达。 ? 在上述耐药机制中，第一、二种耐药 机制具有专一性，第三、四种耐药机 制不具有专一性。 Β - 内酰胺酶 ? β 内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗 生素的灭活酶；该酶位于革兰阳性球菌菌体外， 革兰阴性杆菌间质中； ? 检测方法有微生物培养法、碘－淀粉法、头 孢硝噻吩纸片法。其中头孢硝噻吩纸片法因为 简单、方便、快速，应用于临床检测。 葡萄球菌属 – 青霉素 方法 敏感 中介 耐药 MIC ? 0.12 m g/ml - ? 0.25 m g/ml 纸片扩散法 ? 29 mm - ? 28 mm CLSI M100-S20. Table 2C. 诱导 β - 内酰胺酶的检测 ? 如果青霉素的药敏结果出现以下情况，需 要做 诱导 β - 内酰胺酶 的检测 ： ? MIC ≤0.12 μg/ml ? Zone diameter ≥29 mm 诱导 β - 内酰胺酶试验 苯唑西林 ( 诱导剂 ) - 接种纯菌落于琼脂上 ( 例如， BAP , MHA) ； - 贴 ? - 内酰胺类纸片 ( 例如 , 苯唑西林 , 头孢西丁 ) ； - 孵育过夜； - 测试抑菌圈周围的细菌； - 如果 β - 内酰胺酶阳性 , 报告青霉素 R 。 Pos Neg 超广谱 β - 内酰胺酶（ ESBLs ） ? ESBLs 是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌 素类和单环 ? 内酰胺类氨曲南的一类酶； ? ESBLs 不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物，能被 克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等 ? 内酰胺酶抑制剂 所抑制；