修改第四章植物离体快速繁殖课件.ppt

3 ．培养基成分 培养基中浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度 增加，此外，细胞分裂素的水平过高 4 ．培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多 酚氧化酶的活性提高，从而加速被培养的外植体的褐变程度。 （二）褐变的控制 为了提高组织培养的成苗率，必须对外植体的褐变现 象加以控制，以减轻褐变现象的发生。 1 ．选择合适的外植体 对于某一特定的快速繁殖对象，一般来说，最好选择 生长处于旺盛的外植体，可以使褐变现象明显减轻。 2 ．培养条件： （ 1 ）一般液体培养基上加滤纸桥和半固体培养基能减轻褐 化。 （ 2 ）低盐培养基尤其是 Mn2+ 、 Cu2+ 浓度降低能减轻褐化。 （ 3 ）部分细胞分裂素如 BA 、 KT 等能促进酚类化合物的合成， 刺激多酚氧化酶的活性，因此降低 BA 、 KT 的用量能减轻褐化。 （ 4 ）利用 2,4-D 和 IAA 可延缓多酚合成，减轻褐化的产生， 但外植体在高浓度的 2,4-D 下培养时间过长，愈伤组织变得 松软、呈水渍状，失去分化能力。 （ 5 ）降低培养基中的 pH 值控制酚氧化酶活性和底物利用率， 因为这种酶在 pH=6.5 时活性最强。 （ 6 ）改变氧化 - 还原势常用的还原剂有维生素 C 、柠檬酸、 巯基乙醇、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、半胱氨酸等。使用方法 可以在外植体材料消毒前快速浸入其中 30 秒～ 60 秒，浸泡时 间不可过长，否则外植体褐变会更加严重，因为抗氧化剂对 外植体有一定毒害作用；或用它们浸湿滤纸并在其上进行外 植体的切割。 （ 7 ）利用吸附剂减低或清除酚类产物，如 2 ～ 3 克 /L 的活性 碳能吸收某些酚类产物， 5 ～ 20 克 /L 的聚乙烯吡咯烷酮（ PVP ） 能稳定单宁。但吸附剂在吸附有毒酚类的同时，也要吸附培 养基中的生长调节剂。 （ 8 ）抑制酚氧化酶的活性，常见的是利用鳌合剂鳌合铜离 子降低褐化，如乙二胺四乙酸（ EDTA ）、二乙基二硫代氨基 甲酸脂、二甲基二硫代氨基甲酸脂等。。 （ 9 ）热激处理。利用多酚氧化酶是一种不耐热的酶，在45℃～ 50℃以上活性迅速下降的特点，将外植体在45℃～50℃高温预 处理 45 分钟后再接种，有效地降低褐化。 （ 10 ）改变糖的用量和种类。降低培养基中蔗糖的浓度至 1% 可 减轻褐化，同时若有些植物的外植体在蔗糖中褐化严重，可用葡 萄糖或山梨糖代替以减轻褐化。 3 ．连续转移培养 对容易褐变的材料可间隔 12 ～ 24 小时的培养后，再转 移到新的培养基上，经过连续处理 7 ～ 10 天后，褐变现象便 会得到控制或大为减轻。 三、继代培养中的玻璃化现象及控制 （一）玻璃化现象的特点 进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半 透明水迹状，这种现象通常称为玻璃化。它的出现会使试管 苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。出现玻璃化的嫩茎不宜诱 导生根，因此，使繁殖系数大为降低。 大叶冬青 第四章 植物离体快速繁殖 第一节 植物快速繁殖的概述 一、植物快速繁殖的概念 植物快速繁殖就是利用细胞的全能性理论及细胞的 再生特性，在组织培养条件下，加速繁殖材料的个体生产， 提高繁殖系数，使其在较短的时间繁殖较多植株的方法 ( 它是 一种微型操作过程，称为微繁 ) 。 二、植物快速繁殖的意义 （一）有效保持植物优良品种的特性； （二）生产无病毒的种苗，防止品种退化； （三）快速繁殖新优品种，加速优良品种的推广； （四）节约耕地，节约留种成本，提高农产品的产出率； （五）便于流通与运输； （六）珍稀物种保存； 第二节 植物快速繁殖再生途径 利用植物组织培养技术进行快速繁殖时，植物的根、茎、 叶、叶柄、花器官、孢子等均可作为外植体进行离体培养，通 过下列再生途径诱导分化产生小植株。 （一）器官途径 1. 器官型 植物的茎尖部分是分化组织区，即产生植物地上与地下部 分的全能性区域。存在于叶腋间的腋芽在正常情况下均能发育 成枝条。 游 离 细 胞 或 原 生 质 体 侧芽分化 诱导生根 茎尖 嫩枝 叶片茎段 直接成芽 胚状体 诱导生根 愈伤组织 芽 愈伤组织 胚状体 萌发 植 株 再 生 植 株 2. 器官发生型 器官发生型诱导途径即外植体脱分化形成愈伤组织再分化 出器官的方式。将离体组织或器官在培养基上进行培养时，形成 愈伤组织。将愈伤组织转移到适宜的培养基上继续培养，这些愈 伤组织细胞将发生生理代谢上的改变，经分裂逐步产生分生细胞 团和分生组织，再进一步分化出具有根、茎、叶的完整植株，这 种从愈伤组织再生出小植株的过程叫再分化。 幼根 外植体 愈伤组织 脱分化 植物体 生长点 植株 分离 幼茎 3. 原球茎型 由茎尖或腋芽培养分化成原球茎，最早是 1960 年法国的 Morel 发现虎头兰