PD2 PA2测定 乙酰胆碱和维库溴铵对Nm R的亲和力测定精选.ppt

乙酰胆碱和维库溴铵对 Nm-R 亲和力测定 （ pA2 、 pD2 的测定） 【实验目的】 1 ．学习蟾蜍腹直肌标本的制备方法 和受体激动剂 量 - 效曲线 的测定方法。 2 ．掌握药物的 pD 2 及 pA 2 的定义。 3. 掌握乙酰胆碱和竞争性肌松药 （维库溴铵）对骨骼肌 Nm-R 的 pD 2 和 pA 2 值的 测定 和 计算方法 及其意义 ? 【实验原理】 1. pD 2 为激动剂激动受体产生 50% 最大效应所 需的摩尔浓度的负对数值 2. pA 2 为 竞争性拮抗剂摩尔浓度的负对数值， 在此浓度下，激动剂要产生原有效应其浓度必 须增大 1 倍。 ? 乙酰胆碱 能 激动 腹直肌上的 N m 受体 ，使 腹直肌收缩； 维库溴铵 是竞争性 Nm 受体拮 抗剂，与乙酰胆碱竞争 N m 受体， 阻遏 乙酰 胆碱对腹直肌的收缩作用。 ? 本实验预先加入一定量的 N m 受体 竞争性 拮抗剂 维库溴铵 ， 乙酰胆碱 要达到原有效 应必须增加剂量。由此出现维库溴铵 使 乙 酰胆碱 的 量效曲线平行右移 ，根据曲线右 移情况，可求得乙酰胆碱对 N m 受体的 pA 2 值。 【动物】 蛙或蟾蜍 【方法】 1. 制备长约 1.5 cm 宽约 3-4mm 的上腹直肌。 2. 标本安装、固定同前腹直肌实验， 水浴管 营养液体积 10ml ，充入空气（ 1-3 个 / 秒）。 打开 BL-410 系统，选择药理实验模块，肌 张力测定（或 pA 2 和 pD 2 测定），给予大约 2g 前负荷 ，平衡 10min 。 3. 描记正常张力曲线后，依次给药，观察张 力的变化 ⑴以累加量效曲线法获得 Ach 激动 Nm 受体 的量效曲线。加入顺序和量如下：① Ach10 -5 mol/L 0.1ml ， ② Ach10 -5 mol/L 0.2ml ， ③ Ach10 -4 mol/L 0.07ml ，④ Ach10 -4 mol/L 0.2 ml ， ⑤ Ach 10 -3 mol/L 0.07ml ， ⑥ Ach 10 -3 mol/L 0.2ml ，⑦ ， ⑧ Ach 终浓度分别是 10 -7 , 3 × 10 -7 , 10 -6 ， 3 × 10 - 6 ， 10 -5 , 3 × 10 -5 ， 10 -4 , 3 × 10 -4 mol/L 。 累加次序 Ach 浓度 （ mol/L ） Ach 的毫升数（ ml ） 终浓度 （ mol/L ） 1 10 -5 0.1 10 -7 2 10 -5 0.2 3 × 10 -7 3 10 -4 0.07 10 -6 4 10 -4 0.2 3 × 10 -6 5 10 -3 0.07 10 -5 6 10 -3 0.2 3 × 10 -5 7 10 -2 0.07 10 -4 8 10 -2 0.2 3 × 10 -4 ? ⑵用任氏液冲洗 3 次，待基线基本恢 复正常后，加入 0.267% 维库溴铵溶 液（ 10 -7 mol/L ） 0.1ml ， 5-10min 后 重复 (1) 步骤，记录维库溴铵对 Ach 量 效曲线的影响。 ? 4. 以 Ach 效应为纵坐标，浓度对数为 横坐标作图，初步估计 Ach 对 Nm-R 的 pD 2 值。 5. 直线回归法求 Ach pD 2 值： E/[D] = Emax/KD – E/KD E 为对应 Ach 浓度 [D] 产生的效应。令 E/[D] 为 Y, E 为 X ，上式为直线方程。其中截距（ a ）为 Emax/KD ，斜率（ b ）为 -1/KD 。以 BL-420 分析系 统或 3600P 计算器求出 pD2 ， a 、 b 和 r 值。 6. 计算维库溴铵的 pA 2 值： 按下述公式计算维库溴铵对 Nm-R 的 pA 2 值。 维库溴铵的 pA 2 值 = 维库溴铵摩尔浓度负对数值 + Log[( 无维库溴铵时 Ach pD 2 / 有维库溴铵时 Ach pD 2 )-1]