膜片钳之仪器操作与维护篇.pdfVIP

膜片钳之仪器操作与维护篇 1、电极一旦拉制成功后，其尖端必须作进一步的处理。 目的之一 是为了减小电极内部与溶液之间的电容，即在 电极末梢前数微米处， 涂敷一层疏水材料，如硅酮树脂（Sylgard）。这种物质能够防止液膜爬 上 电极。另一目的是为了对电极尖端作优化处理，如同热抛光的方法 使 电极尖端光滑、周围均匀，以提高实验过程中的封接成功率。 2、关于电极的 问题 a. 洁净的电极是封接的关键。电极需要在使用前拉制完成放在密 闭 容器中，通常在 12 小时内用掉比较好； b. 内液（确切的说是电极液）需要过滤； c. 在 电极入水之前可以加一个正 ，可以吹开电极尖端的液体及灰 尘； d. 如果不用灌流的话，最好 bath solution 也要过滤。 e、电极拉制成功以后，常置于一有盖的容器内，2-3 小时内必须 使用， 电极使用前要进行充灌。在充灌前， 电极内液要用 0.2um 的滤 膜或滤纸进行过滤。利用玻璃管的虹吸作用，溶液可从电极尖端吸入， 也可利用 5ml 注射器在尾端加负 以实现充灌，随后电极从尾端充灌。 电极内液不能漏到夹持器，会使其内表面变湿形成薄膜从而产生热噪 声，在充灌时，电极内出现的气泡可以通过轻敲电极而消失。 3、降低噪声的关键是地线和屏蔽，第一地线接地要好；第二要注 意将一些容易产生噪声的设备屏蔽好，比如显微镜灯光的电源、 电动 微超的马达、监视和记录的电脑以及一些可能产生噪声的电源线，总 之你可以用排除法一一试验，肯定会降低噪声的，一般降低到几个 pA/fA 级即可。另外，你的负 也可以用一个“U”形管通过 3 通管加上。 我认为屏蔽很重要哦，以前我在实验中，常遇到电极入水后方波 有 50HZ 干扰，有时还跳动，很是心烦，想了很多办法就是去不掉，包 括接地线，镀银丝、参比电极，清洗 Holder 等等，甚至怀疑仪器有 问 题，感到有些绝望了！ 后来发现灌流时干扰明显，把灌流装置控制电源搬到法拉第笼子外， 一切就 ok 了！而且发现只要有电源线进入屏蔽笼，即使没有通电，也 有交流干扰，所以所有进入屏蔽笼的电源线都应该用屏蔽线（而不是一 般 电线）。 我体会到在膜片钳实验中一定要“消灭”各种干扰，这样结果才可靠， 而消除干扰靠什么？It is 屏蔽！ 你可以用做铁笼子的铁丝网罩住显微镜电源，若没有屏蔽线，可 以用保鲜用的锡纸包裹导线，只要是 pA/fA 就可以做了！ 4、关于干扰的问题我有以下几点看法： a、屏蔽室是必要的，尽管有时候看起来作用不大，但是如果外界的 电 磁干扰很大，这时候它的作用就显示出来了。 b 、避免干扰的一个原则就是要将屏蔽室内外的各个可能产生电磁干扰 的仪器一定要接地，有时候一个仪器有好几个零部件，有些部件之间 是绝缘的，此时就要将绝缘的部分分别都接地。 c、同一个部件不要重复接地，有时候也可能产生干扰的。 d、关于显微镜的问题： 屏蔽到是没有必要，只要两根线就解决了 1）将显微镜的灯罩打开，在内部的螺丝上接出一根线 2）在显微镜的臂上的螺丝上接一根线 e、此外，浴槽电极与灌流液一定要接触良好，否则的话也会出现干扰 的，有时候开始还挺好，几乎没有干扰，但是在记录的过程中自己什 么也没有动，就突然出现干扰了，很大的一部分原因就在此。这个 问 题曾经也是困扰了我好长时间，体会很深的。 f、接地线到是没有特殊的要求，只要一般的电线就可以了 g、不要让液体流出来（包括灌流和引流的液体），淌到实验台上或是地 面上，这也是产生干扰的一个重要的原因。 h 、我也很赞成开心果果的意见，实验台和实验仪器一定要整齐有序， 恐怕每个实验室也都是这样要求的吧 5、屏蔽线就是用铜网屏蔽电源线，电子市场有卖的。一般用两相线，外 面包有一层铜网，需要注意的是： （1）电线规格，我们用的 电线直径 0.75，这对 220V 足够了，太细满足 不了仪器负荷。 （2）屏蔽线的连接，一端接插头的零线，另一端接仪器的外壳（零线）， 且插座零线要接地（不能虚设）。 （3）电线接头处要连接紧密，并用热缩管套牢。 6、只要灌流装置电源线没有很好屏蔽，即使拔掉插头，仍然有干扰，不 信你试着在有干扰时把灌流装置搬离法拉第笼子，看看有什么效果？ 这种方法就叫排除法（把法拉第笼里的有可能产生干扰的东西一件一 件地搬出来，逐渐排除）。浴槽 电极与灌流液一定要接触良好，否则的 话也会