植物DNA质粒DNA提取以及载体构建.pptVIP

植物DNA、质粒DNA的提 取以及载体构建 植物DNA的提取 1、目的和意义 2、原理 3、试剂的准备 4、操作过程 5、DNA检测 6、注意事项 7、常见问题及解决办法 1、目的和意义: 1、抗性苗的检测 2、分子杂交 3、分子标记 4、基因扩增 2、原理: CTAB(十六烷基三甲基溴化铵 hexadyltrimethyl ammomum bromide)是一种非离子去污剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白, 使核蛋白解聚,从而使DNA游离出来。植物材料在CTAB的 处理下,结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA被 释放出来。CTAB与核酸形成复合物,此复合物在高盐 (0.7mM)浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度 (0.1-0.5 mM NacⅠ)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降 低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经 离心弃上清后,最后用75%的乙醇清洗沉淀,吹干,溶于TE 中 3、试剂的准备 试剂的全称: CTAB:十六烷基三甲基溴化铵 EDTA:已二胺四乙酸二钠 PVP:聚乙烯吡咯烷酮。