突变体的获得方法 文档.ppt

微生物突变体 的获得方法 Home label 来源：生物技术通报 2019 年第 2 期 构建微生物突变体的方法综述 张念章 逯忠新 突 变 体 什么是突变体？ 定义 1 ： 一般指带 有已经发生突变的基因的细胞、 病毒或细菌，有时也指发生突变 的基因。 定义 2 ： 携带 突变基因的细胞或个体。 (mutant) Home label Home label back 物 理 方 法 1. 紫外 2. 电离辐射 3. 离子注入 4. 微波 5. 其它 Home label back 紫 外 紫外线是诱发微生物突变的一种非常有用的工具。 DNA 和 RNA 的嘌呤和嘧啶有很强的紫外吸收能力，最大的吸收 峰在 260 nm 。 因此，波长在 200-300 nm 的紫外光才有诱变作 用。紫外线可引起生物体形成嘧啶 ( 主要是胸腺嘧啶 ) 二聚体、 嘧啶水 合物和引起 DNA 分子交联。 其中形成嘧啶二聚体的生物学效应研究的比较清 楚。由于二聚体的出现会减弱双链间氢键的作用，引起双链结 构扭曲变形。 同时又会妨碍双链的解开，阻碍碱基正常的互补配对，影响 DNA 的复制和转录，从而导致突变或死亡。 尽管不断有新型的诱变技术产生，紫外诱变技术 因其操作简单，效果显著，在很多领域仍然发挥重要作用。 Home label back 电离辐射是指一切能引起物质产生电离作用 的辐射总称。生物学上常用 γ 射线进行辐射，此外还有 Χ 射 线、 β 射线和快中子等。这些射线可直接将能量传递给生 物分子，使细胞中有序排列的生物大分子处于激发和电离 状态。引起遗传物质的变化主要是碱基的氧化作用，糖苷 键及 DNA 单链键或双链键断裂。伴随着生物大分子化学键 的断裂，有机体内产生大量的离子和自由基。这些自由基 与细胞中的溶质分子相互作用，诱发酶的释放，导致代谢 的方向性和协调性紊乱，促使开始的生物化学损伤进一步 发展，引起了机体内环境的进一步变化。 电离辐射 Home label back 离子注入技术最早用于农作物育种，近几年来因其在 微生物诱变育种中的高效性，得到了越来越广泛的应用。 离子注入生物体内会在动量、能量和 质量的三重作用下产生不同的生物学效应。因此，与 生物体的相互作用存在峰值，在峰值范围内，注入离子与 生物体的相互作用是局部的、双重的和不易修复的。 在离子注入过程中，生物分子将会吸收能量，经历复 杂的物理和化学的变化，产生各类自由基。这些活性自由 基，不但可以引起正常生物分子的损伤，致使细胞中的染 色体畸变， DNA 链断裂，也可使质粒 DNA 形成断裂点。产 生染色体重复、易位、倒位，碱基缺失等多种生物学效应。 离子注入技术与目前其它的诱变源相比，具有 LET 值高，射 程可控，集束性好，能量沉积和质量沉积区域集中等优点， 在不同的作物及菌种的诱变育种中发挥出巨大的作用 . 离子注入技术 Home label back 微波辐射属于一种非电离性高频电磁波，在 300 MHz 一 300 GHz 范围内有较强的生物效应，主要对生物体产生 热效应和非热效应。在微波作用下，生物体会产生局部温 度上升 ( 热效应 ) 以及非温度关联的各生理生化反应 ( 非热效 应 ) ，进而产生一系列突变效应。 除上述的方法之外，还有利用其它物理因素进行的诱变，如利用激光、太 空条件等，或多种方法联合使用构建生物突变体。 微波辐射 Home label back 化学 诱变 方式 1. 烷化剂 2. 其它诱变剂及复合诱变 Home label 0. 化学诱变 back 化学诱变剂是一类能和 DNA 起作用， 进而改变 DNA 的空间结构或者结构组成， 导致 DNA 产生变异的物质。按其诱变机 制可分为碱基类似物诱变剂、直接诱变 DNA 结构的诱变剂和诱发移码突变的诱 变剂 3 类。利用化学诱变剂进行的化学诱 变具有使用方便，特异性较强和诱变后 代较易