液相色谱试验基础精选.pptVIP

To Waste Sample Loop (Fixed Volume) From To Column Sample Syringe Load Inject To Column Pump From Pump To Waste 手动进样器－六通阀 31 六通阀之扎针 1 2 3 4 5 6 泵 色谱柱 定 量 环 废液 排空 32 六通阀之装样 1 2 3 4 5 6 泵 色谱柱 定 量 环 废液 排空 33 1 2 3 4 5 6 泵 色谱柱 定 量 环 废液 排空 六通阀之进样 34 1 2 3 4 5 6 泵 色谱柱 定 量 环 废液 排空 六通阀之小刻度进样一 35 手动阀 流路连接 样品回路 废液 排空管 样品回路 到色谱柱 来自泵出口 36 手动进样器 前视图 后视图 样品定量管 37 固定相结构 本章内容： ? 固定相载体结构 ? 正相色谱固定相 ? 键合相色谱固定相 38 Typical Column Si Si Si Si Si Packing Supports Chemically Modified Silica Gel OH Si O Si OH O O Si OH O Si O O Si OH Pores Silica Gel Surface 3 CH CH 3 Si - O - Si - (CH 2 ) 17 CH 3 39 正相 HPLC 极性固定相 有机流动相 传统 目前 硅胶 氧化铝 氰基 二醇基 氨基 吸附色谱 键合相 适用于 : 同分异构体的分离 . 在有机 / 水流动相中不溶化合物的分离 . 适用于中等极性化合物分离 . 40 硅胶柱和氧化铝柱的缺点 容易脱尾 样品被催化分解 不易梯度洗脱 含水量要控制 41 正相色谱键合相 O Si CH 3 Cyano O Si CH 2 ( ) n NH 2 CH 2 Diol Amine C N Si CH OH CH CH O OH 2 2 CH 3 (CH ) 2 n Si CH 3 CH 3 Si Si CH 3 CH 3 42 Particles of Column Packings 50μ m Large Porous Particles 30μ m Pellicular Beads 3-10μ m Microparticulates 2μ m Active Surface 43 键合相柱优点 固定相不易被流动相洗脱 无需饱和色谱柱 非常容易进行梯度洗脱 柱子平衡非常快 使用极性范围宽 选择性唯一 柱容量大 溶质不易污染柱子 44 Agilent 1100 柱温箱 TCC 45 液相色谱基础 本章内容： ? 液相色谱发展史 ? 液相色谱的基本概念 ? 影响峰形扩展的因素 1 ? 历史回顾 1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919) 碳酸钙吸附剂 石油醚 1940‘s - 分配色谱和纸色谱 1950‘s - 气相 , 薄层，凝胶过滤色谱 梯度洗脱色谱 1960‘s - 商业高效液相色谱 . 0 N N N N Mg CH CH 2 3 CH 3 CH 3 H C 3 0 CH 3 CH 3 CH 3 0 CH 3 0 0 2 高效液相色谱 (HPLC) 进样口 检测器 色谱图 色谱柱 溶剂 泵 混合器 HPLC 结构框图 3 液相色谱类型 Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak Bases Ionics, Bases, Acids Compounds Insoluble in Water, Organic Isomers Ionics Inorganic Ions High MW Compounds Polymers Mode Reversed-Phase Io 子 n- Pair Normal-Phase Ion Exchange Size Exclusion Stationary Phase C-18, C-8, C-18, C-8 Silica, Amino, Cyano Diol Anion or Cation Exchange Polystyrene Mobile Phase Water/Organic Modifiers Water/Organic Ion-Pair Reagent Organics Aqueous/Buffer Counter Ion Gel Filtration- Aqueous Gel Permeation- Organic Silica Resin C-4, C-2 化合物类型 模式 固定相 流动相 中性 弱酸 弱碱 反相 C18, C8, C4 氰基 , 氨基 水 /