王昕医械内毒素初菌试验.ppt

山东省医疗器械产品质量检验中心 凝胶法干扰试验 ? 可通过对供试品进行更大倍数的稀释或通过其它 适宜的方法（如过滤 , 中和 , 透析或加热处理等） 排除干扰。为确保所选择的处理方法能有效的排 除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先填 加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干 扰试验。 ? 当进行新产品的内毒素检验试验前，须进行干扰 试验。 ? 或无内毒素检验项的品种建立内毒素检查法时， 须进行干扰试验。 ? 当鲎试剂，供试品的处方，生产工艺改变或试验 环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时 山东省医疗器械产品质量检验中心 凝胶法 —— 干扰试验 5. 试验结果计算 如两组最大浓度 2λ 均为阳性，最低浓度 0.25λ 均为阴性，阴性对照 4 管均为阴 性时，按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（ Es ） 和 用供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（ Et ）。 Es= lg- 1(∑Xs/4) Et= lg- 1(∑Xt/4) 式中 Xs 和 Xt 分别为检查用水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的 对数值（ lg ）。当 Es 在 0.5λ ～ 2λ （包括 0.5λ 和 2λ ）时，且 Et 在 0.5Es ～ 2Es （包括 0.5 Es 和 2 Es ） 时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查。 当 Et 不在 0.5Es ～ 2Es （包括 0.5 Es 和 2 Es ）时，则认为供试品在该浓度下干扰试验，应使用适 宜方法排除干扰。 山东省医疗器械产品质量检验中心 供试品细菌内毒素检查 ? 1. 供试品溶液的制备 首先计算 MVD= CL/λ ，然后将供 试品进行稀释，稀释倍数不得超过 MVD 。 ? 2 . 阳性对照溶液的制备 用检查用水将标准品稀释制成 2λ 浓度的内毒素标准溶液。 ? 3. 供试品阳性对照溶液的制备 用待检测的供试品溶液或 其稀释液将内毒素标准品制成 2λ 浓度的内毒素溶液。 ? 4. 阴性对照液 即细菌内毒素检查用水 . ? 5. 鲎试剂的准备 取若干支鲎试剂轻弹瓶壁使粉末落入瓶 底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕， 75% 乙醇棉球擦拭后启开 备用，防止玻璃屑落入瓶内，每支加入规定容量的检查用 水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气 泡，按 0.1mL/ 支的规格分装 8 管备用。 山东省医疗器械产品质量检验中心 凝胶限度试验溶液的制备 编号 内毒素浓度 / 配制内毒素的溶液 平行管数 A 无 / 供试品溶液 2 B 2λ/ 供试品溶液 2 C 2λ/ 检查用水 2 D 无 / 检查用水 2 山东省医疗器械产品质量检验中心 凝胶法干扰试验溶液的制备 ? 注： ? A 为供试品溶液 ; ? B 为供试品溶液阳性对照； ? C 为阳性对照； ? D 为阴性对照。 山东省医疗器械产品质量检验中心 ? 6. 加样 取 8 支溶解好的鲎试剂，其中 2 支加入 0.1mL 供试品溶液或其稀释液作为供试品管， 2 支加入 0.1mL 阳性对照溶液作为阳性对照管， 2 支加入 0.1mL 检查用水作为阴性对照， 2 支加入 0.1mL 供试品阳性对照溶液作为供试品阳性对照 。（ 37 ± 1 ）℃，（ 60 ± 2 ） min 保温后，观察 并记录结果。 供试品细菌内毒素检查 山东省医疗器械产品质量检验中心 ? 7. 结果判断 当阳性对照、供试品阳性对照都为阳性且阴 性对照为阴性时，试验方为有效。若供试品 2 管均为阴性 ，认为该供试品符合规定；如供试品 2 管均为阳性，应认 为不符合规定；如 2 管中一管为阳性，一管为阴性，按上 述方法另取 4 支供试品管复试， 4 管中如有 1 管为阳性，即 认为不符合规定。若第一次试验时供试品的稀释倍数小于 MVD 而结果出现 2 管均为阳性或 2 管中 1 管为阳性时，按 同样方法重新进行试验，试验时要求将其稀释至 MVD 。 供试品细菌内毒素检查 山东省医疗器械产品质量检验中心 内毒素试验实例展示 凝胶限度法 山东省医疗器械产品质量检验中心 内 容 试验设备 1 2 试验过程 试验耗材 2 3 山东省医疗器械产品质量检