细菌内毒素检查法5说课讲解.ppt

实验注意事项及影响试验结果的因素分析 一、实验注意事项 二、影响试验结果的因素分析 三、企业产品优势 ;一、试验操作注意事项 ——2005年版《中国药品检验标准操作规程》P297细菌内毒素检查法 实验前，须用肥皂洗手，用75％酒精棉球消毒。 在使用洗耳球、移液管取样时，应注意不要将洗耳球中的气体吹入溶液中，以防止气体中的内毒素进入供试液。 复溶0.5ml鲎试剂时，在旋涡混合器上点击1-3秒，促进鲎试剂的溶解。;由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意??要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果。 进行干扰实验时，标准对照系列和含内毒素的供试品溶液系列应同时进行，并使用同一支细菌内毒素标准品。;二、试验误差分析及改进措施 鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 细菌内毒素工作标准品效价及使用的影响 实验器皿的的影响 样品成份及理化性质的影响 实验员的影响 环境的影响 ;1、鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 鲎试剂的质量：抗干扰能力，稳定性； 鲎试剂灵敏度标示值的准确性 。;1）、鲎试剂灵敏度的误差 是否用细菌内毒素国家标准品标定？ 标示值是否准确？ 不同厂家的鲎试剂虽然标示值（λ）相同，但仍然存在较大的误差。比如，标示值为0.5EU/ml的鲎试剂，有的真实灵敏度可能是0.65EU/ml；而另一个厂家的鲎试剂可能是0.30EU/ml时，按0.5-2λ误差标准都是合格产品，但对同一检品在相同的稀释倍数下，这两个厂家的鲎试剂产品对内毒素的检出水平却不同。 ;我本公司对鲎试剂质量得控制： 原料；工艺用水；生产环节；灵敏度标定。 ;2、细菌内毒素标准品引起的误差 细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素标准品操作误差 细菌内毒素单位表示误差 细菌内毒素标准品的错误使用 ;1）、细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素国际标准品 细菌内毒素国家标准品 细菌内毒素工作标准品 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 ?? 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 ——2005年版《中国药典》;2）、细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素工作标准品之间或细菌内毒素工作标准品与细菌内毒素工作标准品之间的生物效价存在一定的误差，用不同细菌内毒素标准品复核同一批鲎试剂灵敏度时可能存在一定的误差。中国药典要求“当λc在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。”试验结果只要在这合格范围内表示鲎试剂标示灵敏度准确。;3）、内毒素标准品操作误差;注意：①只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。 ②只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。 ③若使用的为细菌内毒素国家标准品，可按其使用说明书中的方法将其稀释至规定浓度后分装保存。若为细菌内毒素工作标准品，为一次性使用。 ;4）、错误使用 有部分客户使用厂家生产的细菌内毒素来复核鲎试剂的灵敏度，这是一种错误行为，更有甚者使用厂家生产的细菌内毒素来交叉复核鲎试剂的灵敏度，这是一种严重错误行为。 ;3、实验器皿的影响 器皿的计量管理（校正） 器皿的选择标准 器皿的正确处理;1）、器皿的选择标准 鲎试验对器皿的要求：刻度准确；内表面光滑；易于清理。细菌内毒素检查实验不宜选用注射器，最好使用经过校正的刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不精确，内壁磨沙面吸附内毒素，而且要特别注意注射器针头引入的铁离子对试验结果的干扰，故不宜选用注射器。; 如果用量不大，使用频率不高，建议大家选用本公司提供的一次性耗材。无热原耗材是一种在此行业中被鉴定为无内毒素和β-葡聚糖污染的产品，其中包括, 无热原试管、无热原移液器吸头。这些产品可以给您的工作带来很大方便,另外，当实验出现误差时可首先排除器皿方面的因素,很快分析判断出误差原因。 ;2）、器皿的正确处理 2005年版《中国药品检验标准操作规范》278页——细菌内毒素检查法“实验准备”规定：“将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗净并烘干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出将洗液沥干，用自来水将残余的洗液洗净，再用蒸;馏水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中，迅速置烤箱中，除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素。” 应该特别注意，该规程明确规定最后冲洗玻璃器皿必须“用蒸馏水冲洗，禁用纯化水冲洗。”有的客户使用反渗透制备的纯化水冲洗试验用玻璃器皿，结果试验中所有的阳性对;照都为阴性，复核鲎试剂灵敏度时试验结果误差较大