电镜切片样品制作步骤.pdf

。 扫描电镜样品的准备 A 悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等； 细胞使用 PBS或无血清培养基离心漂洗 1~2 次以去除血清，离心转速依据不同离心机、 不同样品自定，总时间控制在 5min 内；细胞团根据预设浓度在适量 2.5%戊二醛吹悬，滴加 在预先置入青霉素小瓶中的托盘， 4℃静置沉降 2~3 天，在托盘周围加入 PBS，以防止样品 干燥。 B 贴壁培养的细胞： 在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上； PBS或无需请培养基漂洗后，放置在 培养板室温固定 1h，4℃ 3 h ，注意放置干燥，自行转入青霉素小瓶中，加满 PBS送检。 SEM标本处理必须使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。 C组织取材 2 样品观察表面可达 8~10mm, 高度小于 5mm左右； 样品表面在固定前必须清洁： 使用生理盐水或 PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白、 粘液等。能够明确标识标本的观察面。消化道、呼吸道、血管、生殖器官、泌尿等官腔内表 面，尤其要注意先清洗再固定。 如需要观察脏器内结构，应依照不同的实验目的，决定目的脏器是否需要灌注清洗； 固定 2.5%戊二醛浸没标本，室温 1h，4℃固定 3h 以上，换 PBS送检。 附： 2.5%戊二醛的配制 Step 1: 0.2M 磷酸缓冲液的配制： 磷酸二氢钠（ NaH2PO4.H2O） 2.6 克 磷酸氢二钠 (Na2HPO4.12H2O) 29 克 双蒸馏水 加至 500 毫升 pH 调至 7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： 25% 戊二醛 1ml 双蒸馏水 4ml 0.2mol/L 磷酸缓冲液 5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH 值 7.3-7.4 。 1 。 透射电镜样品的制备 一、培养细胞 本方法适用于贴壁、悬浮培养的细胞；细菌；精子；血细胞等。 6 1. 细胞数量： 10 或 6 孔板一孔的细胞达到生长面积的 80%或以上。 2. 离心收集： 消化或用细胞刮刮下细胞。 如细胞状态一般或漂浮物较多， 建议更换新培养 基；如观察自噬，建议刮下细胞。 3. 离心速度、时间依据不同离心机、不同样本自行定义，时间在 5min 内； 4. 细胞团大小：细胞最厚处约 0.5~1.5mm, 或者参照 1 元硬币的厚度； 5. 细胞离心成团后去除上清， 加 2.5% 电镜用戊二醛 500 μl 固定，切勿吹悬， 室温 1h，4 ℃ 3 h 后，去除戊二醛加满 PBS后 4℃放置或送检。 注意： 固定细胞不需要吹悬， 细胞不宜过多， 过多会导致固定液无法迅速渗透到底部细 胞； 二、生物组织 3 迅速剪下 / 切下相应位置，在 2.5%戊二醛中，依据不同组织和实验目的，用刀片修成 1mm 2