PCR原理和检测方法解读.ppt

资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * 资料仅可参考，如有不妥，请联系本人改正或者删除。 * PCR检测对标本采集及保存、运输的要求 咽拭子、粪便、疱疹液、脑脊液等。 用于病毒分离和核酸检测的标本尽早采集。 病毒储存液保存。 冷链运输，尽快送至实验室进行检测。 -20℃长期保存，但是流感样病例标本应于-70℃长期保存 新型甲型H1N1流感检测 核酸提取 使用试剂： 核酸提取试剂盒QIAGEN RNeasy mini kit（74104）； 预冷的70%乙醇溶液（无RNase水配制）（自备）； β-巯基乙醇（自备） 基本步骤： 裂解组织，释放核酸； 除去蛋白杂质； 最后获得核酸产物 注意事项： 1提取核酸过程中使用的所有溶液和耗材必须 经过特殊处理，确保无RNase 2操作过程中必须尽量保持低温，迅速 3操作要在生物安全柜中进行，检测标本 样品和试剂必须在生物安全柜中才可以打开 操作中必须做好防护，防止降解，污染和感染； 4提取好的核酸若不立即进行检测，应于-20℃保存 RT-PCR检测 1）反应体系配制（25ul体系） （在专门的生物安全柜中进行）： 使用试剂盒：QIAGEN one step RT-PCR kit（210212） RNase free water 11.9ul 5×RT-PCR缓冲液 5ul 10mM dNTP 1ul Enzymix 1ul RNasin 0.1ul 上游引物 (20uM) 0.5ul 下游引物 (20uM) 0.5ul 合计 20ul 对每一个