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应用elisa检测青海省部分地区羊衣原体和梭菌抗体 应用elisa检测青海省部分地区羊衣原体和梭菌抗体 绪论 羊衣原体病是由鹦鹉热衣原体（chlamydiapsittaci）引起的一种可在多种动物间广泛传播的人畜共患传染病，牛羊感染后可引起流产（妊娠后期）、早产、死胎及发热、肺炎、肠炎、多发性关节炎、脑脊髓炎和腹泻，种公羊发生睾丸炎等广泛性症候群[1]。在英国，羊衣原体流产占所有流产类疾病的比例约为 50%，年损失超过2 000万英镑，此外，衣原体病也是引起美国山羊流产的最常见病原[2]。在我国，对羊衣原体病的研究始于1978年，从那时起兰州兽医研究所的科研人员就对青海、西藏、内蒙、甘肃等地的羊流产病料进行了分离、鉴定和免疫学研究，调查发现这些地区山羊的流产率高达 20%～25%，而绵羊却很少发生流产[3-4]。随后，我国兽医工作者对国内部分地区羊衣原体病的流行状况陆续进行了调查研究。杨占魁等( 2006) 对青海省乌兰县改良绒山羊进行了衣原体病的血清学调查，结果阳性率达到14.73%[5]，何成基等(2010)对青海省海北州门源县、祁连县、刚察县和海晏县1223 份羊血清采用间接血凝试验进行检测，结果种公羊血清阳性率为6.18%，生产母羊血清阳性率为8.07%[6]；何存利等(2009)对宁夏各地区的16个规模化羊场进行衣原体病调查，发现羊场的阳性率为100%，羊群的平均阳性率为 19.3%[7]。由此可见，羊衣原体病在我国部分地区依然形势严峻，必须采取有效的措施进行防制。 羊的梭菌性疾病(clostridiosisi of sheep)是由梭状芽孢杆菌属(clostridium)的细菌所引起的一类可造成养羊业重大经济损失的急性传染病。这类疾病，具有发病急、病程短、死亡快、死亡率高、临床症状相似、生前诊断困难等特点[8]。羊的梭菌病是由梭菌属的几种主要致病性梭菌引起的羊的类急性传染病。由病败梭菌引起的叫“羊快疫”。d型魏氏梭菌引起的叫“羊肠毒血症”，也叫“软骨病”或“羊快疫”。c型魏氏梭菌引起的叫“羊猝狙”，b型魏氏梭菌引起的初生羔羊梭菌性痢疾，简称羔痢。绵羊、山羊、乳山羊均可感染。因本菌为土壤和污水中的常在菌，羊采食被其芽孢污染的饲料和饮食后，芽孢随之进入消化道，其中一部分被真胃中的胃酸杀死，一部分存活者进入肠道。当胃肠道正常的消化机能受到破坏，尤其是从干草改吃大量谷物或青嫩多汁富含蛋白质的草料后，瘤胃中正常分解纤维素的菌群失调，大量未消化的淀粉颗粒经真胃进入小肠，导致该菌迅速繁殖和产生大量的ε毒素和少量的α毒素。这些毒素进入血液，引起毒血症，使病羊发生休克而死亡。该病有明显的条件性和季节性。在牧区多发于春末夏初青草萌发和秋季牧草结籽后的一段时期；本病以"岁以内、营养良好、膘情较好的羊只多发和死亡较多。尼群、李秀英等分别从此病病原的调查、流行现状、诊治、防治措施等方面进行了研究，同时也得出大量关于此病的认识资料、防控措施。调查发现由于我省部分地区对羊梭菌性疾病疫苗接种情况比较好，所以发病率较低，趋于平缓，没有发生大的浮动，但由此可以看出我省羊梭菌病的存在，而且总体病死率较高[9]。目前，对于该病虽然有多种预防方法，但是任然在许多地方发生，对养羊业造成严重损失。 目前，用于检测羊衣原体和羊梭菌感染的方法很多，如电镜法、乳胶凝集试验、聚丙烯酰胺凝胶电泳法(page)等，但因其各自的一些局限性，很难被广泛采用，自首次报道建立酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbentassays, elisa）以来，由于elisa具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用 。尽管早期的elisa由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐，但随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体动物脾脏有上百万种不同的b淋巴细胞系，具有不同基因不同的b淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的b细胞。被激活的b细胞分裂增殖形成效应b细胞进行阻断elisa试验，都大大提高了elisa的特异性，加之电脑化程度极高的elisa检测仪的使用，使elisa更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。 鉴此，为了解羊衣原体病和羊梭菌性疾病在我省的分布及流行情况，为今后制定防疫对策与措施提供一定的参考，在省内选择三个地区用elisa检测方法进行羊衣原体病和羊梭菌性疾病的血清学调查。现将结果报告如下： 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品 分别从青海天峻、海晏、海东地区采集羊的血液180份、180份、360份，共720份，