沙地云杉组织培养技术规程 __DB2020 内蒙古.pdfVIP

ICS 65.020.20 B 05 DB 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB 15/T 1938—2020 沙地云杉组织培养技术规程 Technical Regulation for Tissue Culture of Picea mongolica 2020-07-30 发布 2020-08-30 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB 15/T 1938—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2020给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。 本标准起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古蒙荣园林绿化工程有限责任公司。 本标准主要起草人：白玉娥、韩彦龙、哈布尔、代金玲、包文泉、彭鹏、娜苏勒玛、苗慧琴。 I DB 15/T 1938—2020 沙地云杉组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了沙地云杉组织培养育苗的术语和定义、环境器具消毒灭菌、培养基、外植体、胚性愈 伤组织诱导、胚性愈伤增殖培养、体细胞胚胎分化培养、体胚干化萌发培养、炼苗、移植培养等基本内 容及技术要求。 本标准适用于利用沙地云杉组织培养技术生产苗木。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程。 DB15/T 1588 元宝枫组织培养育苗技术规程。 3 术语和定义 LY/T 1882和DB15/T 1588界定的术语和定义适用于本文件。 4 环境器具消毒灭菌 4.1 洗涤室和接种室消毒 工作前和结束后，使用臭氧紫外灯照射1 h。 4.2 培养室消毒灭菌 每天工作结束后使用臭氧紫外灯照射消毒2 h。如有较严重的组培苗感染现象，应采用甲醛(HCHO， 10 mL/m³)和高锰酸钾(KMnO4，5 g/m³)混合薰蒸消毒，在密闭条件下熏蒸消毒20 min～30 min，消毒后 要打开门窗通风换气。 4.3 超净工作台消毒灭菌 接种前用臭氧紫外灯照射消毒不少于30 min，并用70 %酒精喷洒消毒台面；定期清洗超净工作台的 过滤膜。 4.4 器具灭菌 4.4.1 接种器具灭菌 在一个接种台班结束后，使用器具流水冲洗后，用锡箔纸包好，置于高压灭菌锅灭菌。接种工具使 用前，用酒精灯外焰灼烧20s以上，或用接种工具灭菌器直接灭菌。 1 DB 15/T 1938—2020 4.4.2 培养容器消毒灭菌 使用后的培养容器，流水冲洗残留培养基，高压灭菌锅消毒后存放。 5 培养基 5.1 基本培养基 胚性愈伤诱导、增殖和分化均采用1/2 LM基本培养基，干化萌发培养采用1/2 MS基本培养基。 5.2 母液和激素配制与保存 5.2.1 母液和激素配制 培养基母液配制见附录A.1、A.2。激素均配制浓度为1.0 mg/mL。 5.2.2 母液和激素保存 母液和激素配制后，贴标签，记录溶液名称、配置时间、配置者，并在4 ℃条件下保存。母液应于 3个月之内使用，母液无结晶、无异色才能使用。 5.3 基本培养基配制 5.3.1 琼脂融化