第14章基因工程-XXXX-12-1.pptx

第14章 基因重组和基因工程 Genetic Recombination and Engineering;生物的变异;主要内容;第一节 自然界DNA重组和基因转移 DNA Recombination and Gene Transfer;第一节 DNA重组 Section I DNA recombination;发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组（general recombination）。通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。;Holliday模型的4个关键步骤： ;片段重组体 （见模型图右边产物）： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体中间含有一段异源双链区，??两侧来自同一亲本DNA。; 内切酶 (recBCD);Holiday中间体;基因修复;Holliday intermediate的电镜照片;二、细菌的基因转移与重组;可接合质粒如 F 因子(F factor) ;（二）转化作用;;（三）转导作用;λ噬菌体的生活史;三、位点特异重组，即特异位点间发生的整合;λ噬菌体的整合酶识别噬菌体和宿主染色体的特异靶位点发生选择性整合；反转录病毒整合酶可特异地识别、整合反转录病毒cDNA的长末端重复序列(long terminal repeat, LTR)。 ; 通过attP和attB间的相互重组，环状的噬菌体DNA转换为整合的原噬菌体，原噬菌体通过attL和attR间的相互重组而切除;1. POP’:O为15bp(核心)富含A-T的非对称序列； P为-160 ~ 0的160bp序列 P’为0 ~ 80的80bp序列 共240bp 2. BOB’:B为-11 ~0序列 B’为0 ~11序列 共23bp;（二）细菌的特异位点重组; H2鞭毛素;（三）免疫球蛋白基因的重排;重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链(IgL)基因的V-J重排均发生在特异位点上。在V片段的下游，J片段的上游以及D片段的两侧均存在保守的重组信号序列(recombination signal sequence, RSS)。;86v基因片段;;四、转座重组; IS家族的结构： ①两端有短的正向重复序列（direct repeats, DR）， ②略长的反向重复序列（inverted repeats，IR）以 及1kb左右的编码区， ③它仅编码和转座有关的转座酶。 对靶的选择有三种形式：随机选择，热点选择和特异位点的选择。 ;;插入序列的复制性转座;转座子(transposons) ——从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。; 细菌的可流动性元件 A插入序列：转座酶编码基因两侧连接反向末端重复序列(箭头所示) B转座子Tn3：含有转座酶、β-内酰胺酶及阻遏蛋白编码基因 C转座子Tn10：含四环素抗性基因及两个相同的插入序列IS10L;由转座子介导的转座;可引起基因突变——插入或切离； 改变染色质的结构（缺失、倒位等）； 可以插入新基因（ampR、terR等）； 在靶序列上引入新的转座子序列，原来序列保持不变； 在靶序列上造成同向重复序列； 产生新的变异，有利于进化。;;;DNA Recombination Technique;重组DNA技术的发展史; 现代基因工程的创始人P·伯格（美国,1926－）1972年，伯格把两种病毒的DNA用同一种限制性内切酶切割后，再用DNA连接酶把这两种DNA分子连接起来，于是产生了一种新的重组DNA分子，首次实现两种不同生物的DNA体外连接，获得了第一批重组DNA分子，这标志着基因工程技术的诞生。伯格因此获得了1980年诺贝尔化学奖。 ;1973年，美国斯坦福大学教授S·科恩和加州大学旧金山分校教授H·W·博耶将两个不同的质粒（一个是抗四环素质粒，另一个是抗链霉素质粒）拼接在一起，组成嵌合质粒，并将其导入大肠杆菌，当该重组质粒进入大肠杆菌体内后，这些大肠杆菌能抵抗两种药物，而且这种大肠杆菌的后代都具有双重抗药性。这表明“杂合质粒”在大肠杆菌的细胞分裂时也能自我复制。;;利用乳腺生产药用蛋白的转基因羊;;;金稻Golden rice;　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。;环境保护　　;　　利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况，却不易