检验科 漫谈高血压免疫检测技术.ppt

漫谈高血压免疫检测技术 发展历史与现状 高血压定义与分类 ? 定义：在未使用降压药物的情况下，非同 日 3 次测量血压，收缩压 ≥ 140mmHg 和 / 或舒 张压 ≥ 90mmHg 。 分类：原发性高血压 —— 病因不明高血压 继发性高血压 —— 指由某些确定的疾病 或病因引起的血压升高，血压升高仅 是这些疾病的一个临床表现。 高血压五项检测 ? 肾素 -- 血管紧张素 -- 醛固酮系统（ RAAS ） 主要应用于鉴 别诊断原发性 和继发性高血 压，肾性高血 压、内分泌型 高血压，原发 性和继发性醛 固酮增多症等 疾病。 ? 下丘脑 — 垂体 — 肾上腺皮质轴 高血压五项检测 主要应用于柯兴氏综合征，柯 兴氏病，席汉综合症，爱迪生 氏病，纳尔逊氏综合征的诊断 等。 肾素前体由 406 个氨基酸组成，其 中包含两个前片段，分别为 20 和 46 个氨基酸。成熟的肾素包含 340 个氨基酸，分子量为 37KD 。 肾素 ? 肾素原，肾素与活性肾素的异同 ? 肾素活性与活性肾素的区别 ? 活性肾素在体内的意义 肾素检测的几个基本概念 无活性的肾素原 有活性的肾素原 肾素 肾素原 活性肾素 肾素检测技术的发展历史 ? 第一代肾素检测试剂 —— 肾素活性检测 试剂盒组分 ： ? 抗 Ang I 多抗包被 管 ? 125 I 标记的 Ang I ? 校准品（ 6 个） ? 质控品 ? 酶抑制剂 ? 洗液 检测步骤 Ang I 转化 将预冷的 200ul 酶抑制剂加入 200ul 血浆样本中，混合均匀后，分为两份，分别置于冰 水浴和 37 度中孵育 1 小时，孵育后将 37 度的样本置于冰水浴中迅速冷却备用。 放免竞争法检测 Ang I 加样 孵育 检测 在多抗包被管中加入： ? 校准品、质控品、待测 样本各 50ul 。 ? 加入 125 I 标记的 Ang I 200ul 。 ? 充分混匀 室 温 (18-25 ° C) 振 荡 孵 育 2 小时 将包被管用洗液洗两次后， 检测。根据标准曲线计算出 样本中的 Ang I 浓度 结果转换 ? 第二代肾素检测试剂 —— 放免平台的活性肾 素检测 肾素检测技术的发展历史 肾素活性 活性肾素 操作复杂 操作简单 环境要求苛刻 无特殊要求 重复性差 高重复性 操作人员要求高 无特殊要求 缺乏标准化 有国际参考标准 F H Perschel, et al. Rapid Screening Test For Primary Hyperaldosteronism: Ratio Of Plasma Aldosterone To Renin Concentration Determined By Fully Automated Chemiluminescence Immunoassays. Clinical Chemistry. 2004 50:9 1650-5 肾素检测技术的发展历史 ? 活性肾素检测，真的靠谱吗？靠谱！ F H Perschel, et al. Rapid Screening Test For Primary Hyperaldosteronism: Ratio Of Plasma Aldosterone To Renin Concentration Determined By Fully Automated Chemiluminescence Immunoassays. Clinical Chemistry. 2004 50:9 1650-5 ? 第三代肾素检测试剂 —— 酶免平台的活性肾 素检测 肾素检测技术的发展历史 无辐射 实验室环境要求低 操作简便 ? 第四代肾素检测试剂 —— 自动化活性肾素检 测 肾素检测技术的发展历史 肾素检测的现状 厂家 DiaSorin 安图 DRG 新产业 广东虹业 检测类型 PRC PRC PRC PRA PRC 技术先进 性 第四代 第四代 三代半 第三代 第一代 第三代 是否全自 动 是 是 否 否 是 否 是否拥有 文号 否 即将获得 否 是 否 ? 安图如何做到活性肾素的检测？ 关键在于安图掌握了那一个关键的抗体。 肾素检测的现状 Cisbio ， DRG