染色质免疫沉淀ChIP关键技术的难点及应用.docxVIP

染色质免疫沉淀（ChIP）技术难点及应用 ?序言 ? 伴随人类基因组测序工作基础完成，功效基因组学研究逐步成为研究热点。而基因表示调控又是功效基因组学一个关键研究领域。研究某个蛋白因子调控功效，能够经过对蛋白活性（激活或抑制其活性），蛋白数量（过表示Overexpression或基因缺点型Knockout）, 和蛋白功效（功效缺点型蛋白Dominant-negative mutation）控制，影响下游基因表示，而下游基因改变又能够经过基因芯片（cDNA Microarray），抑制消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization），差异显示RT-PCR等方法进行研究[1]。然而这些方法全部无法提供证据证实这些改变是受某个蛋白因子直接调整，还是间接其它改变造成结果。所以，要想提供蛋白因子直接调控证据，就要直接检测蛋白质-DNA相互作用。传统方法包含转录因子结合试验（Transcription Factor Assay），电泳迁移率变动分析（electrophoretic mobility shift assay），DNase I 足印法（DNase I footprinting），酵母单杂交系统等。但这些方法全部有一定不足，不能充足反应生理情况下DNA和蛋白相互作用真实情况，而且极难捕捉到在染色质水平上基因表示调控动态瞬时事件[2]。 ? 染色质