临床基因扩增检验培训班PCR污染和预防.ppt

聚合酶链式反应及其污染 与预防污染的措施 协和医院 李一桊 人 临床基因扩坪 检查验收中存在的问题 5份标本(2份标本小于最低检测限) 检测结 (1)与预期靶值完全苛合 (2)阴性对照出现阳性,小于最低检测限的标本 为阳性 (3)阳性标本高于预期值2个数量級 (4)所有阳性标本均低于预期靶值1个及以上数量 聚合酶链式反应 成功的关键因素 保证标本质量与棋板质量 PCR反应体系与反应条件的优化 ·PCR相关仪器的校准 灵敏度、特异性 批内与批间检测的可重复性 预防污染的发生(假阳性) Stephen AB et al. Real-time reverse transcription PCR (QRT-PCR) nd its potential use in clinical diagnosis. Clinical Science (2005)109, 365-379 标本质量与模板质量 Data analysIs IB u222226 e!二 FAM eI b= RoX drop C=FAM creep Real time PcR, 2006 认真分析标准曲线观察PcR反应 体系与反应条件是否正确 O Poor 1相关系数(r2):越接近1越好 2斜率( slope):3.1~36 (100%的扩增效率) 3截距( intercept):333~365 (100%的扩增效率