环境工程微生物技术 微生物的遗传变异 3微生物生理-3.4微生物的代谢与遗传变异.ppt

* 1）暂时保藏法——斜面保藏 方法：斜面置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 优点：适用于各种微生物、简便易行、易 于观察； 缺点：保藏时间短、传代频、易退化、易 污染、工作量大。 改良方法：橡皮塞取代棉塞、加矿油 2）长期保藏法 原理：运用干燥、低温和隔绝空气等手段，降低 微生物菌种的新陈代谢速率，使菌种的生 命活动处于半永久性的休眠状态，以达到 长期保存的目的。 方法： 砂土管法 真空冷冻干燥法 液氮法 1）砂土管法： 干法：（适用于部分真菌、放线菌）将斜面上 孢子刮下，接种于无菌砂土管中（砂 装试管2/5)，搅拌均匀。 湿法：斜面中加3~5ml无菌水制成菌悬液，取菌 悬液10滴加入砂土管，以管内砂全部湿 润为宜。 将砂土管置于干燥器中真空干燥，低温或室温下保藏 适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏。 保藏时间几至几十年。 2）真空冷冻干燥法 3)液氮超低温保藏法： * ④真空冷冻干燥法 在干燥的条件下又保持真空来保藏菌种。 原理：加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥， 使微生物细胞处于半永久的休眠状态，以达到长 久保藏的目的。 方法：用无菌脱脂牛奶作保护剂，加入3ml于斜面中制成 菌悬液，分装在安瓿中速冻真空干燥。 真空度维持在0.1~0.3mmHg,悬液维持冻结状， 水分不断升华，至菌体混合物呈疏松状，熔封。 优点：适用于各种微生物；便于大量保藏；可避免污染， 菌种存活时间长（几到几十年） 缺点：手续繁琐。 ⑤液氮超低温保藏法 方法：用10%甘油、二甲亚砜或蔗糖和吐温80 作保护剂，将菌种分散于其中，或将长 菌的琼脂块放入保护剂中，熔封后迅速 降温至-35℃。预冻后保存在液氮超低温 冰箱中（ -196℃）。 优点：适用于各种微生物的较理想的保藏方法 缺点：需专门设备 使用时速融，30 ~40℃水浴摇动，融后 以无菌手续开启 （1）物理诱变 利用物理因素导致的基因突变。UV、电离辐射等。 重点：诱变机制及DNA损伤的修复 a.机制 DNA的碱基对于UV敏感，当有UV辐射时，就会进行吸收，从而发生DNA结构变化。如：胸腺嘧啶聚合形成胸腺嘧啶二聚体。 DNA的修复（有5种）只讲 a.光复活 需要PHr酶 b. 切除修复 需要DNA 多聚酶、核酸酶及DNA连接酶 c. 重组修复 先复制，组合，修复 d.SOS修复 在DNA受到大范围重大损伤时诱导产生一种应急反应，使细胞内所有的修复酶增加合成量，提高酶活性 e.适应性修复 (2)化学诱变 利用化学物质对微生物进行诱变，引起基因突变或染色体畸变。 (3) 定向培育和驯化 3、基因突变的特点 (1)自发性 概率极低。每104～1010繁殖才有一次出现基因突变体。 (2)可诱变性 (3)可逆性 (4)不对应性 指多种因素导致一种性状的出现。 4.基因突变的表现类型 (1)形态突变 发生可见的形态变化。如大小、结构变化。 正常人的红细胞为圆饼状，可是贫血的人的红细胞为镰刀状，很容易破碎。 (2)生化突变 指原有的特定功能的改变或丧失，但形态不一定变化。 如野生菌 营养缺陷型菌 (3)致死突变 由于突变，无法生存 (4)条件致死突变 经突变后，在某些条件下可以生存，换了就无法生存。如：温度敏感型,对于温度要求严格，超出范围就会死亡。某菌在37℃可以生存，但降到34℃则死亡。 5.基因重组 概念：两个不同性状的细胞DNA融合，使基因重新组合，导致遗传变异，产生新品种的过程。 重组手段：杂交、转化、转导。 (1)杂交 通过双亲细胞的融合，使整套或部分染色体的基因重组。 通过杂交可以获得有目的的新品种。 (2)转化 受体细胞直接吸收供体细胞的DNA片断，并将其整合到自己的基因组里，从而获得供体细胞部分遗传性状的现象。 转化过程：感受态细胞出