(推荐)液相色谱仪操作规程.docx

高效液相色谱系统操作规程 1.目的 规范高效液相色谱系统的使用和维护。 2.范围 本规程适用于高效液相色谱系统的使用和维护。 3.职责 质检室仪器分析员负责高效液相色谱系统的日常使用和维护。 4.系统组成 本系统由多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、 Waters 在线脱气机、自动进样器、紫外检测器、荧光检测器、色谱工作站 / 电脑等组成。 5.程序 5.1.准备 5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用 0.45 μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。 5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正 常。 5.2.开机和泵操作 5.2.1.开机 5.2.1.1.接通电源，依次液相色谱主机，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。 5.2.1.2.打开工作站在线软件，输入用户名和密码，按「 OK」注册进入系统主界面。 5.2.2.更换溶剂，在工作站上，脱气运行。 1 / 5 5.3.平衡系统（分两种情况进行） 5.3.1.等度模式 5.3.1.1.每次以 0.1ml/min 的增量加大流速至 1ml/min ，以超纯水冲洗系统10min。 5.3.1.2.检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。 5.3.1.3.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的 5~10%以内。 如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡。 5.3.1.4.压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少 5~6 倍柱体积的流动相通过系统。 5.3.1.5.观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移 <10-3Au/min，噪声为 10-4Au 数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 5.3.2.梯度模式 5.3.2.1.按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气 泡。 5.3.2.2.在进样前运行 1~2 次空白梯度。 5.4.进样，运行自动进样，直至完成。 5.5.数据处理，运行离线工作站，记录相关数据。 5.6.清洗系统和关机 5.6.1.数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗 10min 后，换 水冲洗。 5.6.3.1. C18 柱先用超纯水以 1ml/min 冲洗 40min 以上，再用甲醇或乙腈冲洗 20min。 5.6.5.清洗完成后，先将流速降到 0，再关闭主机，断开电源。 2 / 5 5.6.6.填写使用记录 简单维护与故障排除一、泵的故障及排除方法 1、泵压力变化较大或没有流动相流出，又无压力指示 1）原因是泵内有大量气体。可打开排放阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽；也可以用一个 50ml 针筒在泵出口处帮助抽出气体。 2）原因是高压密封环变形，产生漏液。必须更换密封环；平时注意不要超出规定的最高压力。 2、泵流量或压力不稳 （ 1）原因是砂滤棒内有气泡或被盐的微晶粒或溢生的微生物部分堵塞。可卸下砂滤棒浸入 10%硝酸内超声除去微生物或盐溶解，或浸入流动相内超声除气泡。再用蒸馏水立即清洗。 2）原因是系统内有气泡。可加大流量排出气泡。 3）原因是单向阀有异物。可卸下单向阀，放入烧杯中，加 10%稀硝酸，用超声波清洗 20 分钟后，再用干净蒸馏水清洗。 3、泵压力过高 原因是管路被堵塞，需要卸下管道清除和清洗；压力过低的原因是管路滴漏，可扳紧各接口和更换损坏的管道。 4、键开关按下，泵不运行，只有嗡嗡电流声此故障原因是电机缺相，电机线圈被烧坏一组或活塞被生锈卡住，应视情况给予排除。 二、紫外检测器的故障及排除方法 1、系统内有气泡 3 / 5 1）如果气泡连续不断地通过流动池，将使噪声增大。必须对流动相进行充分除气。 检查系统各条导管是否漏气。如果导管损坏，必须更换并固紧各接口，加大系统流量驱除气泡。有条件的药厂可配备一部脱气机。 （ 2）如果气泡流在检测器的流动池内，也可使噪音增大。 用手指压紧流动池出口，使池内增压，再快速放出流动相。反复操作数次，但注意不要使压力增加太大，以免流动池破裂或色谱柱冲坏。 2、流动相被污染 当流动池被污染时，可能产生噪音或基线漂移。可用水或甲醇等溶剂冲洗 检测池（要注意溶剂的互溶性）。如果污染严重，就需要依次使用 1mol/L 硝酸、水和新鲜溶剂冲洗，或取出池体清洗，更换窗口。 3、光源灯出现故障 当氘灯使用到极限或者不能正常工作时，可能产生严重噪音，基线漂移，出现平头峰或齿形等异常峰，甚至基线不能回零。这时必须更换氘灯（一般氘灯寿命 1000～2000 小时）。 4、倒峰 （ 1）倒峰的出现，可能是检测器的极性接反。更正后