2017年主管检验技师考试临床免疫学和免疫检验讲义第十六章细胞因子与细胞黏附因子的测定名师优秀资料.pdf

第十六章 细胞因子与细胞黏附因子的测定 细胞因子是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调 节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。 细胞黏附分子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间黏附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞 膜表面表达和可溶性两种形式存在。 二者分别在机体的免疫调节、炎症应答、创伤修复、肿瘤转移等生理和病理过程中发挥重要作用。 细胞因子或细胞黏附分子的检测，不仅有助于临床疾病的诊断、预后判断和疗效观察，而且被视为评 估机体免疫状态的重要方面。 目前，检测细胞因子和细胞黏附分子的方法主要有 生物学测定法和免疫学测定法 。 第一节 生物学测定方法 常见的生物学测定法包括： 基于 DNA检测的分子生物学测定法 ：细胞因子或细胞黏附分子 DNA扩增法、 RNA印迹法、原位杂交法、 核酸酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附分子的基因或 mRNA。 生物活性测定法 ：根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要用于细胞因子的测定。 有助于细胞因子检测的活性作用大致有以下几类：①刺激细胞增殖或集落形成的活性；②维持细胞生 长和存活的特性；③抑制细胞生长或破坏细胞的效应；④促进细胞趋化或抗病毒作用等。 一、 促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法 目前检测指示细胞增殖的方法大致有以下三类：①直接计数法；②细胞代谢活性测定方法；③细胞代 谢产物测定法：包括代谢产物荧光强度测定法（如 ATP 法和 CAMP法）和指示细胞表面标记或可溶性分子测 定法。上述方法中常用 3H-TdR、125I-UdR 掺入法（放射性核素掺入法）和 MTT比色法，前者敏感性髙、结果 客观；后者则可在全自动酶标仪上自动化检测，且无放射性污染，更为常用，但敏感性不如放射性核素掺 入法。 （一）放射性核素掺入法：通过细胞 DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。该法的优点是结 果客观，可常规用于 大标本量的测定 ，但方法的特异性受依赖细胞株依赖程度的影响。此外，测定过程中 需要使用放射性核素，废物的处理较繁琐。 （二）MTT比色法：不使用放射性核素，以细胞代谢变化作为增殖指征来检测细胞因子生物活性的测 定方法。 二、 细胞毒活性测定法 对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死亡。待测细胞因子做一系列稀释 后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标， 死细胞数量与细胞因子的活性成正 比。如 TNF杀伤肿瘤细胞的测定 。 三、 抗病毒活性测定法 抗病毒活性测定法主要用于 IFN 等细胞因子的检测。 四、 趋化活性测定法 具有趋化活性的细胞因子，也称趋化因子，诸如 IL-8 、IL-16 、PANTES、MCP及 MIP 等，能诱导 中性粒 细胞、单核 - 巨噬细胞或淋巴细胞 等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。 趋化性 是 诱导细胞由趋化因子 低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性， 可采用琼脂糖和 Boyden 盲端微孔小 室趋化试验测定。化学增活性则指细胞因子增强细胞随机运动能力的特性，可采用琼脂糖小滴化学动力学 试验测定。 某些细胞因子（如 IL-1 ）的活性可通过刺激特定细胞分泌的 代谢产物 而间接反映，据此建立的测定方 法， 称为 细胞因子诱导产物测定法 。通过测定所诱生产物的水平， 了解待测细胞因子活性强度。 例如， IL-1 可诱导胸腺细胞分泌 IL-2 ，IL-2 的水平可间接反映 IL-1 的活性；IL-12/18 诱导 IFN- γ，IL-6/8 诱导 IL-17 等，也可分别用类似的方法检测 IL-18 和 IL-6/8 水平。细胞因子诱导产物测定法，是目前测定 IL-1 最常 用的方法。 五、 生物学活性测定方法学评价 用于细胞因子生物学活性测