第二章色谱法应用基础薄层色谱.ppt

? c 碘熏法 2.2.6 定性分析 ? 1 、 R f 值 ? 又称比移值，是溶质的 运动速度与展开剂的运 动速度之比值。 第二章 色谱法应用基础 2.2 薄层色谱 2.2.1 薄层色谱的特点及原理 ? 原理 ? 吸附剂 — 载体（固定相） ? 流动相经吸附剂，借毛细管作用上升 ? 根据待分离组分对流动相、固定相相对亲和力不 同加以分离。 ? 核心：吸附、解析、再吸附、再解析 …… ? 常用：吸附薄层色谱 薄层色谱的特点 ? 方法简便、价格低廉 ? 分析快速（ GC 、 HPLC 时间长） ? 在色谱板上检测样品，不丢失组分 ? 可使用多种显色剂，既能检测所有组分，也 可只检测指定组分 ? 可在同一色谱板上同时分离多个样品（定性、 定量分析和跟踪反应过程，二次展开） ? 所需样品量少， 5 ～ 10mg ? 灵敏度高 TLC 与 HPLC 比较 展开形 式 流速控 制 平衡时 间 分析样 品数 板高 /μm TLC 展开 毛细管 作用 短 同时多 个 ～ 30 HPLC 洗脱 泵调节 不定 一个 2 ～ 5 TLC 与 HPLC 比较 有效板 数 检测方 式 溶剂用 量 溶剂更 换 固定相 TLC ＜ 600 静态 少 易 一次性 HPLC 10000 动态 多 难 反复使 用 2.2.2 薄层色谱性质 ? 样品（待测混合物）性质 ? 固定相 ? 流动相（展开剂） 重点选择展开剂 1 ）样品（待测混合物）性质 ? 溶解性：极性、弱极性和非极性溶剂溶解性 ? 酸碱性： pH 值 ? 极性：相似相溶 一般有机物的极性由小到大排列顺序 ? 饱和烃＜不饱和烃＜醚＜酯 ＜醛、 酮 ＜胺 ＜羟基化合物＜酸 ＜离子 化合物（如 R + NH 3 ， RCOO - 等） 2 ）常用吸附剂的吸附能力 ? 蔗糖＜纤维素 ＜淀粉＜碳酸钙 ＜硫酸钙 ＜ 碳酸镁 ＜硅胶＜活性炭 ＜氧化镁 ＜三氧化 二铝 ? 亲脂性化合物 TLC 用固定相 ? 三氧化二铝、硅胶、乙酰纤维素等 ? 亲水性混合物 TLC 用固定相 ? 纤维素、硅藻土、聚酰胺和离子交换树脂 常用 TLC 吸附剂 ? 硅胶（ Silica Gel ） ? 多孔网状结构的中性或弱酸性吸附剂，适用 于酸性及中性物质的分离（大部分有机物均 可），碱性化合物能与硅胶作用，拖尾或无 法展开 ? 氧化铝 ? 可用于碱性或中性化合物的分离 ? 纤维素 ? 亲水性强，用于亲水性化合物的分离 按照吸附剂（固定相）分类 TLC 可分为 ? 吸附薄层色谱 ? 是以吸附剂（固定相）和被分离物之间的吸附作 用为基础进行样品分离的形式 ? 分配薄层色谱 ? 利用被分离物在流动相和固定相的相对极性差异 来分离的形式 吸附薄层色谱和分配色谱的主要特点 方法 吸附薄层法 正相分配薄 层色谱 反相分配薄 层色谱 主要分离对 象 疏水（亲脂） 弱极性或中 等极性有机 化合物 亲水无机物、 亲水极性有 机物 相似的疏水 物质 薄层类型 活性吸附剂 含水缓冲液或 极性很强的有 机液体的吸附 剂，无活性 含非极性固 定液的吸附 剂，无活性 方法 吸附薄层法 正相分配薄 层色谱 反相分配薄 层色谱 流动相 多种有机溶 剂 用水或缓冲 液饱和的有 机溶剂 极性溶剂 常用的薄层 材料 硅胶、氧化 铝 纤维素、无 活性硅胶 改性纤维素、 硅烷化硅胶 2.2.3 展开剂及三者关系图 ? 1 ）常用展开剂洗脱能力（溶剂从吸附剂上解 脱被吸附物质的能力） ? 石油醚（己烷、戊烷等）＜环己烷＜二硫化 碳＜四氯化碳＜四氯乙烯＜苯＜二氯甲烷＜ 三氯甲烷＜乙醚（无水）＜四氢呋喃＜乙酸 乙酯（无水）＜甲基乙基甲酮＜正丁醇＜乙 醇＜甲醇＜水＜冰乙酸＜吡啶＜有机酸 ? 洗脱能力逐渐增强 2 ）三者关系图 2.2.4 TLC 展开方式 ? 上行展开 ? 下行展开 ? 一次展开 ? 二次展开 ? 单向展开 ? 双向展开 ? 径向展开 2.2.5 TLC 显色方法 1 ）化学法 ? a 芳胺类 ? Ehrlich 试剂 1,2- 萘醌 -4- 磺酸 ? 菲醌（主要用于邻苯二胺类） ? 茚三酮（用于鉴定脂肪胺、氨基酸等） ? 如 L- 丙氨酸、甲酯、（ S ） -2- 氨基丙醇等鉴定 另一机理 b 酚类化合物 ? 喷洒重氮盐，形成有色 染料斑点 ? 2tCl 3 显色，黄褐色 ? 氨水（熏）显色 c 醛类化合物 d 其它方法（通用） ? 高锰酸钾氧化法 ? 硫酸法 ? 酸碱指示剂 pH 指示剂，溴酚蓝，甲基橙等 2 ）物理法 ? a 紫外下观察化合物荧光 ? 萘、蒽醌的磺化物 256nm ? b 荧光法 ? 采用荧光吸附剂，或采用荧 光物质溶液处理滤纸 ? F254