沙门氏菌测 5资料.ppt

沙门氏菌的检测 授课教师:汪清美  实验目的 掌握沙门氏菌属的检测方法 2了解沙门氏菌的基本生化反应及原理  实验器材 3菌种:沙门氏菌、大肠杆菌 2检样:鲜鸡蛋 3培养基:四硫磺酸钠黄绿(πB)增菌液;氯化镁孔雀 绿增菌液(MM);亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸 铋(BS)琼脂;HE琼脂;Ss琼脂;三塘铁琼脂(TS) 4设备:冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、 无菌锥形瓶、无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管、无菌毒 细管  α四硫磺酸钠黄绿(TTB)增菌液 基础液900m “硫代硫酸钠溶液100mL 碘溶液20.0mL 煌绿水溶液2.0mL 牛胆盐溶液50.0mL 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每 加入一种成分,均应摇匀后再加入另 一种成分。  基础液 蛋白胨10.0g 蒸馏水1000mL pH70±0.2 牛肉膏50g 氯化钠3.0g 碳酸钙45.0g(碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程 中维持一定ph否则ph过低影响菌株生长另外还有筛选 产酸菌的作用) 除碳酸钙外,将眢成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入 碳酸钙,调节pH,高压灭菌121℃,20min  硫代硫酸钠溶液 統代硫酸钠(含5个结晶水)50.0g 蒸馏水加至100mL 高压灭菌121℃,20min。(硫代硫酸钠作为中和剂 可以灭菌12115min,没有影响的,检验含有次氯酸钠 的消毒水微生物,需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液;培养 基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸,能抑制大部分大 肠埃希氏菌的生长,而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生 因为沙门氏菌具有四硫磺酶,能分解四硫磺酶。  TTB培养基使用方法和注意事项 4使用方法:称取本品935g8,溶解于1050m蒸馏水中 加热溶解,临用前加入20%碘液20m05g煌绿2m 2注意事项:TTB培养基不加碘液可在410度冰箱保存 加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙 沉淀为正常现象。  3.原理:四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来, 它对大肠菌群有抑制作用,对沙门氏菌无影响。因沙门氏 菌具有四硫磺酸酶,能分解四硫磺酸钠,而大肠菌群没有 这种酶,故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂,可使沙门氏菌 不致因酸碱度改变而死亡  2氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 甲液:胰蛋白胨5g;磷酸二氢钾1.6g;氯化钠8g蒸馏水 1000ml; 2乙液:氯化镁40g;蒸馏水100ml ·3丙液:0.4%孔雀绿水溶液 4制法:上述成分配好后,12度高压灭菌15mn,临用时t 取甲液90m;乙液9m丙液09ml  M菌液各成分的作用 姨蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求; 氯化钠可维持均衡的渗透压 磷酸二氢钾是缓冲剂; 氯化镁可以增加培养基的渗透压; ·孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长, 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性