离子交换层的基本操作.pptVIP

第八章外源基因表达产物的分离纯化 重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 二常用的分离方法 三基因重组蛋白包涵体的分离和复性 四重组蛋白质的鉴定 、重组蛋白分离纯化方法选择的基本原则 ●针对不同的产物表达形式采取不同的策略 ●针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类型 ●多种分离纯化技术的联合运用 ●合适分离纯化介质的选择 ●分离纯化过程的规模化 1.针对不同的产物表达形式采取不同的策略 采用分泌型战略表达重组蛋白,通常体积大、浓度低,因此应在纯化之前采用 沉淀或超滤等方法先进行浓缩处理; 采用包涵体型战略表达重组蛋白,应先离心回收包涵体; 采用融合型战略表达重组蛋白,一般是胞内可溶性的,拟首先选用亲和层析 进行纯化 表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中的蛋白质,应用低浓度的溶菌酶处理,然 后再用渗透压休克法释放重组蛋白。 2.针对不同性质的重组蛋白选择不同的层析类 等电点处于极端区域(pl≤5或pl8)的重组蛋自应首选离子交换法进行分 离,这样很容易除去几乎所有的杂蛋自 重组蛋自特异性的配体、底物、抗体、糖链等都是首选亲合层析 疏水层析和反相层析是根据蛋自质的疏水性差异进行分壽的 凝胶过滤层析是据蛋自的分子量和体积差异进行分的 3.多种分离纯化技术的联合运用 在选择分离纯化方法时应遵循下列原则: ○应选择不同分离纯化机理的方法联合使用 应首先选择能除去含量最多杂质的方法 应尽量选