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配置 PDA 或 DAD检测器液相色谱峰纯度检测及其应用(二) 2016-12-29作者 ： Bruce Lee 来源 ：药渡头条 本文接上篇 ：配置 PDA 或 DAD检测器液相色谱峰纯度检测及其应用(一) 1、概述 利用 PDA 或者 DAD检测器的全波长数据采集存储能力 ，通过光谱的比对可以实现对色 谱峰纯度的检测 ，以此达到判断是否有其他相关杂质共洗脱现象。前文介绍了通过比较光谱数 据组向量之间夹角与噪音的cosine或者 sine值的大小关系 ，进而实现色谱峰纯度的检测 ，其 中就包括有 Shimadzu LCsolution以及 Waters Empower两类 CDS ，分别如下图 1-1与 1-2。 Fig.1-1 Peak purity determination by cosine with Shimadzu LCsolution Fig.1-2 Peak purity determination by sine with Waters Empower PDA 或者 DAD检测器实现色谱峰纯度检测的根本基础在于 ，对采集到的任一时刻的吸收 光谱与参比吸收光谱进行对比。除了数据组向量的方式之外也有其他的实现方式 ，如相关系数 法。 对于一个色谱峰而言 ，其任一时刻的吸收度均是样品浓度的线性函数 ，假设取色谱峰上的 任意 2个时间点的光谱 ，其中一条光谱在光谱范围内的吸光度作为纵坐标 ，另外一条光谱在光 谱范围内的吸光度作为横坐标 ，分别进行线性回归分析。如果该色谱峰是纯的 ，在 XOY 坐标 平面内的线性回归曲线的相关系数就会比较大 ，线性关系较好 ，反之 ，在 XOY 坐标平面内的 线性回归曲线的相关系数就会比较小 ，如下图2所示。 Fig. 2 Peak purity determination by relevant coefficient 在线性回归的时候 ，其相关系数 r的计算可按照下图3 中公式进行 ，而图2 中的 Similarity 则是相关系数 r的平方乘以 1000而来 ，最大为 1000 ，最小为 0 ，值越大色谱峰纯度也就越高 ， 计算如下图4所示。 Fig.3 Formula for calculation of relevant coefficient Fig.4 Formula for calculation of Similarity with Agilent ChemStation 按照该种方法对色谱峰纯度进行检测的就包括Agilent 的 ChemStation系统 ，其中Agilent 会给出两种显示模式 ，如下图5所示。其中图5A 为均一化视图窗口 ，图5B为相似度窗口。 Fig.5 Peak purity determination by Similarity with Agilent ChemStation 无论是相关系数法或者数据组向量比较纯度角法对色谱峰的纯度进行检测的时候 ，其结果 一般均是参考意义的 ，色谱峰纯度检测通过并不是色谱峰无共洗脱相关物质的充分必要条件。 而且 ，一些 PDA 或者 DAD检测器的采集参数或者数据处理参数的设置以及样品浓度的大小 也会影响色谱峰纯度检测的结果 ，如检测器的光谱带宽设置 ，狭缝宽度的设置 ，光谱采集范围 的设置 ，参比吸收光谱的选择 ，噪音的选择 ，样品的浓度等。 2、色谱峰纯度检测结果的影响因素 任何影响色谱峰的吸收光谱的吸收度以及吸收光谱形状的参数设置 ，均会对色谱峰纯度检 测结果产生或大或小的影响。 首先 ，PDA 或者 DAD检测器的光谱带宽的设置大小主要影响光谱的分辨率(resolution) ， 而对吸收度的影响与具体的化合物有关 ，一般带宽越宽 ，在一定范围内其吸收度越低。光谱带 宽设置的越宽 ，其光谱的分辨率越小 ，设置的越窄 ，光谱的分辨率也就越高 ，如下图6所示。 Fig.6 Influence of bandwidth on the peak height and spectrum 光谱的分辨率越高 ，越能够真实的反映分析物的实际紫外吸收状况 ，对于色谱峰纯度检测 越有益 ；当光谱带宽设置过大的时候 ，一些特征吸收位置可能会被平均掉 ，进而使得与相关杂 质的吸收光谱之间的区分度