【培训课件-临床色谱质谱检验技术】_色谱分析概论(二）.pptxVIP

第二章 色谱分析概论;色谱理论—塔板理论;复习;;色谱理论;色谱理论需要解决的问题： 色谱分离过程的热力学和动力学问题 影响分离及柱效的因素与提高柱效的途径 柱效与分离度的关系 解答如下问题： 组分保留时间为何不同？ 色谱峰为何变宽？ ;塔板理论 阐述影响柱分离的效能指标 阐述色谱分离的热力学过程 速率理论 阐述影响柱效的因素 阐述色谱分离的动力学过程 ;色谱理论—塔板理论;塔板理论 马丁和辛格首先提出的色谱热力学平衡理论 将色谱分离过程比拟作蒸馏过程，把色谱柱与分馏塔做了一个类比，将连续的色谱分离过程分割成多次的平衡过程的重复； 经过多次分配平衡，分配系数小的组分，先离开蒸馏塔，分配系数大的组分后离开蒸馏塔。由于蒸馏塔内的塔板数相当多，因此即使组分分配系数只有微小差异，仍然可以获得好的分离效果。 ;物质在两相间的分配是瞬间完成的； 塔板高度为一个常数，塔板高度用H表示 塔板编号为依次为0, 1, 2, 3…..n, 总塔板数为n+1，由于n很大，故n+1近似与n相等; 所有物质在开始时全部进入零号塔板里； 物质的分配系数不随其浓度变化，在两相的分配系数不管在哪个塔板里都是一样的，即K为常数。 物质在一个塔板和另一个塔板之间无纵向扩散。 流动相不是连续地进入分馏塔（色谱柱），而是脉冲式，即一个“塔板体积”的载气进入后，再进入另一个“塔板体积”的载气。 ;色谱柱长：L 虚拟的塔板间距离：H， 色谱柱的理论塔板数：n， 则三者的关系为： n = L / H 当色谱柱长度一定时，塔板数 n 越大(塔板高度 H 越小)，被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。;假设有一根色谱柱，它有5个理论塔板，在每一个小段内有同样体积的固定液和气体的空间。而有一个物质，它在此色谱柱内的分配系数是1（K=1），用载气（流动相）把此物质带入色谱柱使其在柱内进行分配。在上述假设成立的情况下，100μmol物质通过这个色谱柱进行分配的过程。 ;;塔板理论的模拟过程;塔板理论的特点;忽略了气相色谱中的分子轴向扩散 流动相的运动是跳跃式的、不连续的假设显然违背了实??色谱过程 实际色谱过程难于达到真正的平衡状态 分配系数与浓度无关只在一定的范围内成立 ;色谱理论—速率理论;1956年荷兰学者van Deemter（范.第姆特）等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论——速率理论。 吸收了塔板理论中板高的概念，并充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较好地解释了影响板高的各种因素。 该理论模型对气相、液相色谱都适用;范.弟姆特方程，即速率方程的数学简化式为： H = A + B/u + C·u H：理论塔板高度， u：载气的线速度(cm/s) A，B，C为常数，分别代表：A-涡流扩散项系数、B-分子扩散项系数、C-传质阻力项系数 速率方程表明： 减小A、B、C三项可提高柱效； 存在着最佳流速；;速率理论—涡流扩散项（A） ;速率理论—涡流扩散项（A） ;速率理论—分子扩散项B/u（纵向扩散项） ;速率理论—分子扩散项 ;由于气相色谱以气体为流动相，液相色谱以液体为流动相，它们的传质过程不完全相同，仅以气相色谱为例展开： 对于气液色谱，传质阻力系数C包括气相传质阻力系数Cg和液相传质阻力系数Cl两项，即 C＝Cg＋Cl ;速率理论—传质阻力项;气相传质过程是指试样组分从气相移动到固定相表面的过程 气相过程中试样组分将在两相间进行质量交换，即进行浓度分配。有的分子还来不及进入两相界面，就被气相带走；有的则进人两相界面又来不及返回气相。这样，使得试样在两相界面上不能瞬间达到分配平衡，引起滞后现象，从而使色谱峰变宽。; H = A + B/u + C·u 载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，流速?，柱效? 载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，流速?,柱效?;H - u曲线与最佳流速： 由于流速对这两项完全相反的作用，流速对柱效的总影响使得存在着一个最佳流速值，即速率方程式中塔板高度对流速的一阶导数有一极小值 以塔板高度H对应载气流速u作图，曲线最低点的流速即为最佳流速;组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使两相间的分配平衡不能瞬间达到；这些因素是造成色谱峰展宽、柱效下降的主要原因； 通过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效（气相色谱而言，液相色谱同理） 速率理论为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响； 各种因素相互制约：如载气流速增大，分子扩散项的影