病理检验技术、教学服务模块 7.染色封片、教学课件 组织切片的染色—苏木精-伊红染色的染料种类.pptx

病理检验技术常规组织病理技术 组织切片的染色苏木精-伊红染色的染料种类苏木精一伊红染色 苏木精(hematoxylin)和伊红(casin)简称HE。苏木精和伊红两种染料联合染色称HE染色。是病理学和组织学最常应用的一种染色方法，即苏木精把胞核染成蓝色，伊红把细胞质、胶原纤维和肌纤维、红细胞等染成深浅不同的红色。常规HE染色是病理学制片技术最基本的方法，HE制片是临床病理诊断的基本手段和重要依据。苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料1.苏木精的性质 苏木精为一种无色或淡灰黄色粉末，分子式为C16H14O6，分子量为302.288，市售有无水和含3个结晶水两种。苏木精存放过久或与空气接触，可慢慢被氧化而颜色变深，用被氧化的苏木精配制染液会影响染色效果。苏木精易溶于乙醇、甘油，微溶于水，是细胞核的良好染料。苏木精本身无染色能力，经氧化成为苏木红后，才成为一种染料。苏木精被氧化成苏木红，这个过程又称为成熟。 苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料2.苏木精的氧化 用苏木精配制苏木精染色液时，需将苏木精氧化为苏木红。苏木精氧化有：自然氧化和人工氧化。 自然氧化：把配制好的苏木精染色液暴露于日光和空气中。特点：氧化慢，但保存的时间较长。人工氧化：在配制苏木精染色液时加入一定量的氧化剂，如氧化汞、碘酸钠、高锰酸钾或铁盐等使苏木精立即被氧化成熟。特点：氧化快速、但要掌握好氧化剂的量，避免过度氧化或氧化不足。常用的氧化剂是氧化汞和碘酸钠。 氧化汞难溶于水，通过加热才能起强氧化作用，所以配制?Hamis苏木精染液时，要煮沸苏木精溶液后才加入氧化汞，之后又需要迅速冷却，避免过度氧化，这也是Harris苏木精染液不易配好的原因。 碘酸钠是目前首选的氧化剂在常温下加入即可起氧化作用。理论上，1g苏木精·3H2O被完全氧化成苏木红需185mg碘酸钠，而1g无水苏木精被完全氧化成苏木红需碘酸钠218.2mg。在实际配制苏木精染液时，常用半量碘酸钠，目的是先使部分苏木精氧化成苏木红，染液中未被氧化的苏木精在染液保存和使用过程中再慢慢被空气氧化成苏木红。这样染液既不会过染，又不断有新的苏木红形成和补充，从而可延长苏木精染液的使用寿命。但碘酸钠用量过少，形成苏木红少，染液染色力弱，染色时间需延长。 苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料2.苏木精的氧化 影响苏木精氧化的因素 1)苏木精染液pH：染液偏碱性氧化快，中性时稍慢，酸性时很慢。通常在苏木精染液加冰醋酸或柠檬酸延缓氧化。 2)氧化剂的量：加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有关，如把染液靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。 3)温度：用碘酸钠等作为氧化剂时，在常温下加入即可，而用氧化汞作为氧化剂时，需把苏木精液煮沸时加入才能放氧。 苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料3.媒染剂和苏木精的染色机制 苏木精被氧化成苏木红，苏木红为弱酸性，呈红色，仍不具染色力。用单纯的苏木红液染组织,呈弥浸性染色，而且着色浅淡，但当苏木红液加入二价或三价的金属盐(如铝盐和铁盐)后，苏木红就能与这些金属盐结合形成色淀。这些色淀带有正电荷，能与细胞核牢固结合。这种二价或三价的金属盐称为媒染剂。 苏木精-伊红染色的染料种类一、苏木精染料4.配制各种苏木精染液所需试剂种类和作用（1）苏木精染色液的种类：苏木精染色液有多种，如Ehrlich、?Harris、?Mayer、Carazzi、改良?Lillie-Mayer和Gill等。（2）配制苏木精染液所需试剂的作用 1)氧化汞、碘酸钠：氧化剂，使无染色力的苏木精经氧化后转变成有染色力的苏木红。 2)硫酸铝钾、硫酸铝铵或硫酸铝：媒染剂，其三价铝离子与苏木红结合形成蓝色色淀与细胞核内核酸的磷酸根牢固结合。 3)无水乙醇：能快速溶解苏木精，并可抑制真菌的生长。苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法（2）配制苏木精染液所需试剂的作用 4）乙二醇：一种醇类，能较快溶解苏木精。因其沸点高，使苏木精染液不易蒸发。 5）甘油：稳定剂，防止苏木精过度氧化，减少苏木精染液蒸发，延长苏木精染液的使用时间。 6）冰醋酸：可抵消氧化剂的氧化，使苏木精与苏木红保持均衡，同时又可增加细胞核的选择性染色，使细胞核染色质显示清晰细致。 7）柠檬酸：作用和冰醋酸相同，加入柠檬酸1g，相当于冰醋酸20ml。 8）水合氯醛：起保护剂作用。 苏木精-伊红染色的染料种类和配置方法一、苏木精染料 5.常用苏木精染液的种类 苏木精染液配制的好坏，决定染色的质量。苏木精液配制法有近20种，加上各种改良的方法则更多。常用的苏木精染液主要有：改良lillie-mayer、?Harris、mayer、Gill、?Ehrlich和?Carazzi六种。 国内外已有多种配好的苏木精染液