超高效液相色谱串联质谱法检测鸡粪中16种残留抗生素-最新年文档.docVIP

超高效液相色谱串联质谱法检测鸡粪中16种残留抗生素 　　1引 言 　　抗生素在促进动物生长、预防和治疗动物疾病等方面具有重要作用，因此被广泛用于畜禽养殖业[1]。据统计，2013年我国抗生素总使用量约16.2万吨，其中52%为兽用抗生素[2]。摄入动物体内的抗生素大多未能被充分吸收，?s有60%～90%的抗生素以原型或代谢产物的形式随粪尿排放到环境中，人为地增加了土壤或水体环境中抗生素含量[3，4]，提高了环境中抗性基因丰度，给人类健康和生态环境带来长期、潜在的危害[5]。目前，畜禽粪便中抗生素的处理主要有好氧发酵和厌氧消化两种途径，大量研究表明，好氧发酵可以更有效地降解畜禽粪便中抗生素[6，7]。为了更有效地监测畜禽粪便中抗生素残留，提高抗生素在环境中的检出效率，建立有效的前处理方法，减少基质干扰，发展灵敏、可靠的分析技术是研究抗生素环境残留的基础。 　　目前，畜禽粪便中抗生素药物残留的检测技术有酶联免疫检测技术（Enzymelinked immunosorbent assay， ELISA）[8，9]、气相色谱质谱联用技术（Gas chromatographymass spectrometry， GCMS）[10]、毛细管电泳分析技术（Capillary electrophoresis detection technique，CE）[11]、液相色谱技术（Liquid chromatography， LC）[12～14]和高效液相色谱质谱（HPLCMS）[15]等。酶联免疫检测技术操作简单，但对试剂的选择性高，不能同时分析多种成分； 气相色谱质谱联用技术灵敏度高，且具有广泛的谱库，适合分析挥发性成分，缺点是测定前需要采用衍生化处理，操作繁琐，稳定性差； 毛细管电泳检测技术分辨率高，进样量少，保留时间短，但是灵敏度低，重现性差； 液相色谱检测技术测定范围广， 可灵活调节流动相的组成和pH值，能够使相当数量极难分离的待测物质得以测定，与质谱检测器串联可以提高灵敏度和精确度，已成为应用广泛的检测分析技术[16～18]。 　　本研究采用具有高灵敏度和高选择性的固相萃取超高效液相色谱质谱联用方法，建立了鸡粪中四环素类、磺胺类、喹诺酮类和大环内酯类等16种抗生素的快速检测方法。经优化后，本方法以50%乙腈的磷酸盐缓冲液提取3次，确保目标物的提取效率； 同时采用液相色谱质谱联用法检测，保证了样品检测的灵敏度。采用本方法优化的提取液和旋蒸的净化方式，得到的目标物回收率更高，方法检出限和定量限更低。结果表明，本方法简便、快速、准确、灵敏，可在25 min内完成粪便中四环素、磺胺、氟喹诺酮和大环内酯类16种抗生素的同步提取与同时测定。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　UltiMate 3000超高效液相色谱、Thermo LTQ XL离子阱质谱（美国Thermo公司）； Thermo Hypersil GOLD C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，3 μm，美国Thermo公司）； SAX阴离子交换柱（3 mL/200 mg，美国Thermo公司）； HLB小柱（6 mL/500 mg，美国Waters公司）； 十二孔固相萃取装置（美国Supelco公司）； AvantiTMJ20XP离心机（美国Beckman Coulter公司）； NEVAPTM111氮吹仪（美国Organomation公司）； RE52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）； QL901旋涡混合器（海门市其林贝儿仪器制造XX公司）。 　　目标物盐酸土霉素（OTC）、四环素（TC）、盐酸金霉素（CTC）、强力霉素（DOX）、磺胺对甲氧嘧啶（SM）、磺胺二甲嘧啶（SM2）、磺胺氯哒嗪（SCP）、磺胺甲恶唑（SMX）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹?f啉（SQ）、诺氟沙星（NOR）、盐酸环丙沙星（CIP）、恩诺沙星（ENR）、红霉素（ERY）、罗红霉素（ROX），均购于中国食品药品检定研究院； 泰乐菌素（TS）和醋酸钠购于SigmaAldrich公司。 　　甲醇、乙腈（色谱纯，Fisher公司）； 实验用水为超纯水（电阻率≥18.2 MΩ?cm）； Na2EDTA、Na2HPO4、HCl、NaOH、H3PO4等均为分析纯。 　　2.2标准溶液与缓冲溶液配制 　　将1 L 0.1 mol/L柠檬酸溶液和625 mL 0.2 mol/L Na2HPO4溶液混合，配制成McIlvaine 缓冲溶液。必要时用0.1 mol/L HCl或NaOH调至pH 4.00±0.05。将McIlvaine 缓冲溶液和乙腈溶液按1∶1（V/V）混合，制得提取液。 　　准确称取上述13种抗生素目标物标准品各10 mg，以甲醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶，