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实验一 显微镜油镜的使用和细菌三种基本形态观察 二、基本原理 油镜是显微镜物镜中重要的镜头，其上刻有 “OI ” 或 “HI ”字样，也有以刻一圈红线或白线为 标记，用于区别其它物镜。油镜的使用比较特殊，需在玻片与镜头之间加滴镜油，其原理如下： 1． 增加照明强度 油镜的放大倍数可达 100 ×，其镜头焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。需在 油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（ n=1.55 ）相仿的镜油（通常用香柏油，其折射率 n=1.52 ）， 目的是使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失，基本上全进入镜头，因此提高了照明强度， 使图像更加清晰。不同介质的折射率是不同的，用空气作介质，折射率为（ n=1）; 用水作介质，折 射率为（ n =1.33 ），它们的折射率都比香柏油低，其光线通过玻片后会发生折射或全反射，不能完 全进入物镜，造成光的损失，结果降低了视场亮度，使图像不清晰。由此可见，提高介质的折射率， 就可提高图像的清晰度。 2 ． 增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率是指显微镜能分辨两点间最小距离（ D）的能力。 D 值愈小则表明分辨率愈强。 D 值可用如下下公式表示： λ D = 0.61 N A 式中入 =光波波长； N A= 物镜的数值孔径值。 分辨率取决于物镜的数值孔径和光源波长，即显微镜分辨率与物镜的数值孔径成正比，与光波 波长成反比。波长愈短，数值孔径愈大，分辨距离愈短，则分辨能力就愈强。光学显微镜的光源不 可能超出可见光的波长范围（ 400～770nm），虽然利用紫外线作光源可提高分辨率，但应用范围有 限，只适用于显微镜摄影而不适用直接观察。数值孔径则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质 的折射率，即指介质的折射率与镜口角 1/2 正弦的乘积，可表示为： a NA＝ n ﹒sin 2 式中 n=物镜与标本间介质的折射率； a=镜口角（通过标本的光线延伸到物镜前透镜边缘所形 成的夹角 图 1-1 ）。 2 图 1-1 物镜的镜口角 影响数值孔径的因素之一是镜角口。式中 a 为光线最大入射角的半数。它取决于物镜的直径和 焦距。当 Sin （a/2 ）增到最大时， a/2=90 ° ，就是说，进入透视镜的光线与光轴成 90°角，这是 不可能的，所以 Sin(a/2) 的最大值总是小于 1。现在所用的油镜其 a/2 为 60°左右。影响数值孔 径的另一因素是介质的折射率，前面已说到，不同介质的折射率是不同的，空气的折射率为 1.0 ， 水的折射率为 1.33 ，香柏油的折射率为 1.52 ，玻璃的折射率为 1.55 。因此，在物镜和玻片标本间 加入香柏油作介质时，数值孔径就可以增大到 1.2 — 1.4 。人们肉眼所能感受的光波平均长度为 0.55 μm，假如数值孔径 NA=0.65 高倍物镜，能分辨两点之间的最小距离为 0.42 μm，而小于 0.42 μm的两点之间距离就分辨不出，而使用数值孔径 NA=1.25 油镜，能分辨两点之间的最小距离 =0.552 ×1.25=0.22 μm。因为不论总放大倍数多大，用普通光学显微镜是无法观察到小于 0.2 μm 的物体。但是大部分