发酵过程控制技术 02-09发酵罐接种操作 教学课件-发酵罐接种操作.pptVIP

2.液体接种：液体接种技术是一种用移液管、滴管或接种环等接种的工具将菌液移接到液体三角瓶，试管培养基中的一种接种方法。 （1）由斜面培养基接入液体培养基 （2）由液体培养基接种液体培养基 ①用无菌滴管或移液管吸取菌液接种 ②直接把液体培养液摇匀后倒入液体培养基中 ③利用无菌空气备压后，把液体培养液注入另一容器的液体培养基中， ④利用负压将液体培养液吸到液体培养基中，如在抗生素生产中。 回忆： 谷氨酸发酵系统设备及工艺流程介绍 谷氨酸发酵的工艺流程介绍 3.发酵培养 ⑴空罐清洗灭菌：121℃ 1.5小时，灭菌过程打开各路排气阀门。 ⑵发酵培养基： 葡萄糖 14% 尿素 0.5% 硫酸镁 0.06% 磷酸氢二钾 0.12% 玉米浆 0.2% 糖蜜0.2% pH 7.0 发酵定容：6500 ml，接种量1.5%(即100 ml) ⑶实罐灭菌：将配制好的培养基加入到发酵中，先用夹套加热到95℃，然后改用直接蒸汽加热到121℃，保温20分钟。再关闭蒸汽，改用自来水冷却至32℃。 ⑷谷氨酸发酵工艺的控制 ①发酵培养基与种子培养基 ②培养基的灭菌 ③种子的扩大培养 ④接种技术 ⑤温度控制 ⑥pH控制 ⑦OD净增控制 ⑧溶解氧控制 ⑨泡沫控制 ⑩放罐指标 （一）、发酵培养基与种子培养基的关系 1.种子培养基 种子培养基是指供孢子发芽和菌体生长繁殖使用的培养基。这些营养成分应是易被菌体吸收利用的，且比较丰富与完整，其中氮源和维生素的含量应略高些，但总浓度以略稀薄为好，以利于菌体的生长繁殖。此外，还要考虑pH。 种子培养基的氮源一般采用有机氮源与无机氮源结合，有机氮源中的有些氨基酸能刺激孢子发芽，而无机氮源容易利用，有利于菌体迅速生长。最后一级的种子培养基，其成分要接近发酵培养基。 2.发酵培养基 发酵培养基是生产中供菌体生长、繁殖和合成产物而设计的培养基。 发酵培养基的碳源和氮源要注意速效与迟效的搭配，尽量少用速效营养，多用迟效营养，并要注意调整适当的碳氮比，添加缓冲剂稳定pH。如果微生物生长和产物合成所需要的最佳条件不同，则可以考虑采用补料的方式来满足微生物在不同阶段的需求。 发酵培养基的营养物质用量一般较大，在大规模生产时宜采用来源充足、成本低廉的原料，还应有利于下游的分离提取。 3.发酵培养基与种子培养基的不同。 发酵培养基不仅是供给菌体生长繁殖所需要的营养和能源，而且是菌体生长繁殖所需要的营养和能源，而且是构成谷氨酸的碳架来源，要积累大量谷氨酸，就要有足够量的碳源和氮源，其用量大大地高于种子培养基，对于菌体繁殖所必须的营养因子—生物素却要控制其用量。 （二）、发酵培养基的灭菌 1.培养基灭菌的意义： 微生物是无孔不入、无处不在的，但在自然界却很难找到纯培养状态下生长的微生物。自从发酵工业利用纯培养技术以来，许多发酵过程特别是氨基酸等新型发酵工业都要求纯种培养，即在培养期间除大量繁殖生产菌外，不允许其他微生物存在（通常称之为杂菌）。 2.高压蒸汽灭菌法：压力蒸汽灭菌是在专门的压力蒸汽灭菌器中进行的，是热力灭菌中使用最普遍、效果最可靠的一种方法。 其优点是穿透力强，灭菌效果可靠，能杀灭所有微生物。目前使用的压力灭菌器可分为两类：下排气式压力灭菌器和预真空压力灭菌器，适用于耐高温、耐水物品的灭菌。 二、种子扩大培养流程 1.种子扩大培养的一般流程 保藏菌种 斜面活化 一级种子培养 二级种子培养 发酵罐 3.放线菌孢子的制备 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28℃。培养时间为5~14天。 2.种子罐级数的确定 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，取决于： （1）菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度； （2）所采用发酵罐的容积。 比如： 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27℃,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（27℃，10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级