复习荧光偏振分析方法.ppt

传统荧光偏振分析技术面临的挑战： 荧光偏振变化量较小，灵敏度较低 解决的方案 MAP探针 (Mass Amplifying Probe) §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 Anal. Chem. 1995, 67, 3945-3951. 核酸检测 蛋白质增强荧光偏振 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 Anal. Chem. 2012, 84, 5535-5541. 小分子检测 蛋白质增强荧光偏振 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 凝血酶 (thrombin) 小分子检测 Anal. Chem. 2012, 84, 7203-7211. 蛋白质增强荧光偏振 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 单链结合蛋白SSBP (Single-strand binding proteins） 离子检测 Analyst, 2012, 137, 2770-2773. 特殊结构核酸增强荧光偏振 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 一. 调节机体和细胞的渗透压 二. 调节体液的酸碱平衡 三. 参与体内蛋白质和糖类的代谢 四. 维持正常的神经兴奋性和心肌运动 K+的作用 离子和小分子检测 Chem. Commun. 2014,50, 2049-2051. 特殊结构核酸增强荧光偏振 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 与蛋白质和核酸相比，纳米材料具有良好的热稳定性、更大的质量和体积且易于合成和进行表面修饰，因此用纳米材料增强荧光偏振具有潜在的应用价值。 纳米材料 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 纳米粒子显著增大了分子相互作用的荧光偏振值变化 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 Angew. Chem. Int. Ed. 2008, 47, 8386-8389. 汞离子检测荧光偏振探针检测限达到0.2 ppb，比传统荧光偏振方法提高3个数量级，检测时间只需20分钟，具有良好的特异性 MAP探针 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 AuNP-DNA System DNA-DNA System AuNP Enhancement 0.2 ppb Quantitative Analysis Anal. Biochem. 2010, 401, 47-52. DNAzyme自组装荧光偏振探针 MAP探针 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 Chem. Commun. 2012, 48, 7480-7482. 纳米二氧化硅颗粒增强荧光偏振探针 §6.2 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 * * * * * * * * * * * * * 第6章 荧光偏振分析方法 传统荧光偏振技术及发展情况概述 1 纳米增强荧光偏振一般策略及应用 2 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 光的偏振性 非偏振光原理图 偏振光原理图 自然光在各个方向振动是均匀分布的 一束光线都在同一方向上振动 荧光偏振 （Fluorescence Polarization，FP） Polarized excitation 100% 0% 100% 0% 1926年Perrin首次在研究论文中描述他所观察到的荧光偏振现象。 如果被激发的荧光物质处于静止状态，该物质仍将保持原有激发光的偏振性； 如果被激发的荧光物质处于运动状态，该物质发出的偏振光将区别于原有激发光的偏振特性，也就是所谓的荧光去偏振现象。 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 如何衡量：偏振值的定义 P = - + 偏振值一般以mP（毫偏）来表示 r = - + 2 对于完全偏振发射，P = r = 1；对于自然光，P = r = 0 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 偏振值的影响参数 偏振值衡量荧光分子的运动性 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 分子的偏振性与分子旋转弛豫时间成比例，分子旋转弛豫时间是分子转过68.5度角时所用的时间； 分子旋转弛豫时间与介质黏度、绝对温度、分子体积和分子重量和气体常数有关。 20世纪50年代Weber进一步拓展了荧光偏振理论并首次将荧光偏振用于生化分析领域。 20世纪80年代，随着荧光探针和荧光偏振分析仪器商业化，荧光偏振技术在生命科学等各个领域扮演越来越重要的角色。 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 §6.1 传统荧光偏振技术及发展情况概述 荧光偏振分析的一般步骤 利用荧光偏振的原理，通过检测荧光素标记的小分子与其它分子相互作用前后分子量的变化，计算水平方向及垂直方向的荧光值作相关分析。 如果被检测分子大，激发时运动慢，测得的荧光偏振光值高。如果分子小，分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将去偏振化，测得的偏振光值低