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;一、转基因植物概述;
1、学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理;
2、掌握农杆菌介导转化植物的实验方法,了解转基因技术
的操作流程。;
根癌农杆菌,属根瘤菌科,为革兰氏阴性。根癌农杆菌感染双子叶植物时,可在被感染的伤口形成冠瘿瘤,诱导有关的质粒为Ti质粒 。Ti质粒上有一段T-DNA区,人们将外源基因插入到T-DNA区,借助农杆菌的感染使携带外源基因的T-DNA区转入植物基因组中,从而实现外源基因向植物细胞的转移和整合。
;
1、仪器:超净工作台,离心机,恒温摇床,组织培养室;
2、试剂:农杆菌EHA105,YEB培养基,MS液体培养基,共培
养基(MS+6-BA+NAA),分化培养基(MS+6-BA)
生根培养基(MS+IBA+NAA);
3、材料:红花无菌苗。;五、实验方法;(二)制备工程菌(摇菌)? ; 将农杆菌离心,2000 rpm,10min,收集菌体,目的是去除细菌培养基的高浓度盐。;(四)重悬菌体 ; 将预培养的红花子叶放入
菌液中浸染8-25min,在侵染过
程中轻轻摇晃,确保菌液充分进
入到红花子叶中。
; 取出外植体,将其放在无菌滤纸上,充分吸干菌液,避免菌液残留在红花子叶上,使其在培养过程中,菌液过量生长。; 首先将红花子叶置于共培养上,使其生长。培养一周后,将其转入分化培养基上,进行培养,待其诱导分化出不定芽后,继续培养,不定芽分化成苗后,将其移入生根培养基中,培养获得转基因植株。;六、实验结果;七、注意事项;八、思考题
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