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抗氧化酶（ SOD 、 POD、CAT ）活性测定方法 一、 超氧化物歧化酶（ SOD ）活性测定（ 氮蓝四唑光化还原法 ） 1、试剂的配制 （1）0.05mol/L 磷酸缓冲液 (PBS ，pH7.8) ： A 母液： 0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液 : 取 Na HPO ·12H O （分子量 358.14 ）71.7g ； 2 4 2 B 母液： 0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液：取 NaH PO 2H· O （分子量 156.01 ）31.2g。 2 4 2 分别用蒸馏水定容到 1000ml 。 0.05mol/L PBS （pH7.8 ）的配制：分别取 A 母液 (Na HPO ) 228.75ml ，B 母液 (NaH PO ) 2 4 2 4 21.25ml ，用蒸馏水定容至 1000ml 。加入 10gPVP （聚乙烯吡咯烷酮） 参考文献： 李合生主编：植物生理生化实验原理和技术 .高等教育出版社， 2000：267～268 。 （2 ）130mmol/L 甲硫氨酸溶液 ：取 1.399g Met 用磷酸缓冲液（ pH7.8 ）定容至 100ml 。 网上说定容到 100ML 我也不懂。拜托 （3）100 μmol/L EDTA-Na 2 溶液：取 0.03721g EDTA - Na2 用磷酸缓冲液定容至 1000ml ； （4 ）100 μM 核黄素溶液：取 0.0075g 核黄素用 蒸馏水 定容至 100ml ，避光保存， 随用 随配，并稀释 10 倍 （5）750 μmol/L 氮蓝四唑 （NBT ）溶液：称取 0.06133g NBT 用磷酸缓冲液定容至 100ml 避光保存； 酶液制备： 取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉） 0.5g 于预冷的研钵中，加 2ml 磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆，加缓冲液使终体积为 10ml 。取 5ml 于 10000r/min 下离心 10min ，上清液即为 SOD 粗提液。 提取酶液时如何保存 ;如果没有测完的需要放在 4℃的冰箱里 。 2、酶活性测定 2．显色反应 取试管（要求透明度好） 5 支， 3 支为样品测定管， 1 支为对照管，另外 1 支作为空白，按表 39-1 加入各溶液。 混匀后将空白管置暗处，其它各管于 4000lx 日光灯下反应 20min （要求各管受光情况 一致，反应室的温度高时时间可适当缩短，温度低时时间可适当延长） 。 表 39-1 各溶液加入量 试 剂（酶） 用量 (ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L 磷酸缓冲液 1.5 13mmol 130mmol/L Met 溶液 0.3 75 μmol 750 μmol/L NBT 溶液 0.3 100 μmol/L EDTA-Na 2 液 0.3 10 μm