沉降菌检验统一标准操作作业规程.doc

目标 叙述洁净室（区）空气中沉降菌检测操作规程，确保药品质量，预防生产环境对产品污染，确保试验室环境达成检测产品要求。 适用范围 适适用于本企业洁净室（区）沉降菌监测和洁净度等级验证。 人员职责 测试人员对洁净室（区）沉降菌测试。 内容 术语和定义 下列术语和定义适适用于本规程。 菌落：细菌培养后，由一个或多个细菌繁殖而形成细菌集落，简称CFU，通常见个数来表示。 沉降菌：用GB/T16292-20XX 提及方法搜集空气中活性微生物粒子，经过专门培养基在适宜生长条件下系繁殖到可见到菌落数。 沉降菌菌落数：要求时间内每个平板培养皿搜集到空气中沉降菌数目，以cfu/皿表示。 测试原理：本测试方法利用沉降法，即经过自然沉降原理搜集空气中生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见菌落数，以平板培养中菌落数来评定洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁净区洁净度。 监测周期：A级洁每次室验做监控，B级每七天一次，C级每三个月一次，D级每六个月一次监控。 测试方法： 使用设备和材料 高压灭菌锅：使用时应严格根据操作规程进行。 恒温恒湿培养箱：必需定时对培养箱进行校验。 培养皿：通常采取φ90mm×15mm培养皿。 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）； 已灭菌配制好培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养72小时，若培养基平皿上确无菌落生生即可供采样用，制备好培养基平皿应放在2-8℃环境中存放。 清洁剂：75%酒精 测试时间： （1）对单向流，如A级净化房间内及超净工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 （2）对非单向流，如B级、C级、D级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。 （3）培养皿采样时间：静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上； 动态测试时，培养皿暴露时间为小于4小时。 采样点数及其部署 （1）最少采样点数目： 面积(M)（m2） 洁净度等级 A级 B级 C级 D级 M﹤10 2～3 2 2 2 10≦M﹤20 4 2 2 2 20≦M﹤40 8 2 2 2 40≦M﹤100 16 4 2 2 注：表中面积，对于单向流洁净室（区）、洁净工作台，指是送风面积，对非单向流洁净室（区），指是房间面积。 （2）最少培养皿数 洁净度等级 所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计） A级 14 B级 2 C级 2 D级 2 （3）采样点部署 洁净室（区）采样点部署宜努力争取均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏。下列多点采样采样点部署图示可作参考（见图1） 图1平面采样点部署图 A级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施采样点宜部署在正对气流工作面上，气流形式可参考图2、图3。 图2水平单向流气流形式 图3垂直单向流气流形式 ①工作区采样点位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作台面）。 = 2 \* GB3 ②取样时，应尽可能避免在回风口周围取样（距离1m以上），且测试人员应在取样下风测，并尽可能少走动。 ?可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。取样时，取样设备会对 流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织干扰。 测试步骤： 采样方法 用无菌容器将预先培养培养基（无菌平皿）放至传输窗，紫外灯照0.5小时，待检测用，将培养皿取出，用75%酒精擦平皿表面，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露时间不少于30min，现将培养皿盖，盖后倒置培养。检测时记下培养皿打开起始时间和结束时间。 培养： 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。30℃-35℃培养，时间为72小时。 每批培养基应有对照试验，检验培养基础身是否污染，可每批选定3个培养皿做对照培养。 菌落计数 用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检验，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重合，可分辨时仍以2个或2个以上计数。 注意事项 测试用具要做灭菌处理，以确保测试可靠性、正确性。 采取一切方法预防人为对样本污染。对培养基条件及参数具体统计。 因为细菌种类繁多，差异甚大，计数时通常有透射光于培养皿后面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长菌落，必需时用显微镜别。 采样前应仔细检验每个培养皿质量，如发觉变质、破损或污染应剔除。 测试状态 沉降菌测试前，温度在18℃-26℃，相对湿度在45%-65%，洁净区和非洁净区和洁净区和洁净区之间静压差＞10Pa。 测试人员 测试状态有静态和动态两种，并在汇报中注明测试状态。静态测试时，室内测试人员不多于2人。被测试洁净区已消毒，测试人员必需穿戴符合环境洁净度等级工作服。 结果计算 用计数方法得出各个培养皿菌落数。 平均菌落数计算见下式： 计算公式： M= 式中M为平均菌落数（CFU） Mi表示1，2，3，……n号皿菌落数；n表示平皿总数。 标准 洁净