BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书.doc

BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书 产品简介 蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的 BCA蛋白质检测试剂 (bicinchonic acid)是理想的蛋白质定量方法 ;是当前比 Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白 质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂 SDS，TritonX-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂 (EDTA，EGTA)、还原剂 DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。 基本原理 碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+，Cu+与 BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 主要特点 1.准确 xx,线性 xx: BCA试剂的蛋白质测定范围是 10－2000ug/ml； 2.快速： 45 分钟内完成测定，比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。 3.经济实用： 在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。 4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。 5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。 包装及保存 1 / 5 BCA试剂 A70ml 室温保存 BCA试剂 B1.4ml 室温保存 蛋白标准 C0.5ml-20℃保存 (5mg/1ml BSA) 本试剂盒自订购 xx 一年内有效。 注意事项 1.在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或 37℃温育使溶解 ,如发现细菌污染则应丢弃 2.样品中若含有 EDT A、EGT A、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用 TCA沉淀去除干扰物质。 3.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔 ,每次 均应做标准曲线。 4.当试剂 A 和 B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭情况下可保存 1 周。 5．需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 540-595nm 之间， 562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计 测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。 使用说明 1.配制工作液 : 2 / 5 根据标准品和样品数量，按 50 体积 BCA试剂 A 加 1 体积 BCA试剂 B （50:1）配制适量 BCA工作液，充分混匀。 BCA工作液室温 24 小时内稳定。 2.稀释标准品： 10 微升标准品用 PBS稀释至 100 微升（标准品一般可用 PBS稀释），使终浓度为 0.5mg/ml 。将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加 PBS补足到 20 微升。 3.加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中，补加 PBS到 20 微升。 4.各孔加入 200 微升 BCA工作液， 37℃放置 30 分钟。 5.冷却到室温，用酶标仪测定 A562，根据标准曲线计算出蛋白浓度。 BCA 蛋白浓度测定试剂盒使用说明书 产品简介 蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。博奥森开发的 BCA蛋白质检测试剂 (bicinchonic acid)是理想的蛋白质定量方法 ;是当前比 Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白 质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂 (EDTA，EGTA)、还原剂 DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。 基本原理 碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+，Cu+与 BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 主要特点 3 / 5 1.准确 xx,线性 xx: BCA试剂的蛋白质测定范围是 10－2000ug/ml； 2.快速： 45 分钟内完成测定，比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。 3.经济实用： 在微孔板中进行测定，可大大