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组成部分 数量 Taq 酶（ 60 μl/ 管） 1 管 HSV Ⅱ阴性质控品（ 150 μl/ 管） 1 管 HSV Ⅱ强阳性质控品（ 200 μl/ 管） 1 管 HSV Ⅱ临界阳性质控品（ 200 μl/ 管） 1 管 HSV Ⅱ阳性定量参考品（ 1.0 ×104 基因拷贝 /ml ）10 μl/ 管 1 管 HSV Ⅱ阳性定量参考品（ 1.0 ×105 基因拷贝 /ml ）10 μl/ 管 1 管 HSV Ⅱ阳性定量参考品（ 1.0 ×106 基因拷贝 /ml ）10 μl/ 管 1 管 HSV Ⅱ阳性定量参考品（ 1.0 ×107 基因拷贝 /ml ）10 μl/ 管 1 管 5.6 试剂储存条件：保存于— 20 ℃，有效期 6 个月。 6 仪器 ABI 7500 全自动基因扩增检测仪 7 操作步骤 7.1 DNA 提取 7.1.1 阴性质控品处理 a ) 取 出阴性质控品， 8,000rpm 离心数秒，吸 50 μl 至 0.5ml 灭菌离心管中，加入 50 μl DNA 提取液充分混匀， 100℃恒温处理 10± 1 分钟； b ) 12000r/min 离心 5min ，备用。 7.1.2 标本处理 7.1.2.1 生殖泌尿道分泌物棉拭子 a ) 向玻璃管中加入 1 ml 灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干棉拭子； b ) 吸 取全部液体转至 1.5ml 离心管中， 12,000rpm 离心 5 分钟； c ) 去 上清，沉淀加灭菌生理盐水 1ml 混匀， 12,000rpm 离心 5 分钟 d ) 去 上清，沉淀中加入 50 μl DNA 提取液充分混匀， 100℃恒温处理 10 ±1 分钟； e ) 12,000 rpm 离心 5 分钟，备用。 7.1.2.2 尿道口或患病部位刮片 a ) 向玻璃管中加入 1 ml 灭菌生理盐水，充分震荡摇匀； 以下处理同 7.1.2.1 （a~e）。 7.1.3 HSV Ⅱ临界阳性质控品处理（同阴性质控品） ； 7.1.4 HSV Ⅱ强阳性质控品处理（同阴性质控品） ； 7.1.5 HSV Ⅱ阳性定量参考品处理： 8000rpm 离心数秒，备用； 7.2 PCR 扩增 7.2.1 试剂准备 （在试剂准备区操作） ：按比例 （HSV Ⅱ PCR 反应液 40 μl/人份 + Taq 酶 3 μl/ 人份） 取相应量的 PCR 反应液及 Taq 酶，充分混匀后按 43 μl/管分装至 0.2ml 离心管中备用。 7.2.2 加样： 向准备好试剂的 0.2ml 离心管中， 分别加入处理后的样品 （包括样本、阴性质控品、 临界阳性质控品和强阳性质控品）上清液 2 μl ，或直接加入阳性定量参考品 2 μl ， 8000rpm 离心数秒， 放入仪器样品槽。 7.2.3 设置 PCR 循环扩增程序如下 93℃ 2 分钟 预变性； 93℃ 45 秒 → 55℃ 60 秒 10 个循环 93℃ 30 秒 → 55℃ 45 秒 30 个循环 第 49 页/ 共 93 页 8 结果判断： 8.1 如果增长曲线不呈