人抑制素BINHB酶联免疫分析ELISA.docVIP

人抑制素 B（INHB）酶联免疫分析（ ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关 液体样本中抑制素 B（INHB）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抑制素 B （ INHB ）水平。用纯化的人抑制素B （INHB ）抗体包被微孔板， 制成固相抗体， 往包被单抗的微孔中依次加入抑制素 B（ INHB ）， 再与 HRP 标记的抑制素 B（ INHB ）抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底 洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最 终的黄色。颜色的深浅和样品中的抑制素 B（ INHB ）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下 测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中人抑制素 B（ INHB ）浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1 份 1 份 封板膜 2 片（ 48） 2 片（ 96） 密封袋 1 个 1 个 酶标包被板 1× 48 1× 96 2-8℃保存 标准品： 54ng/L 0.5ml × 1 瓶 0.5ml × 1 瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶 1.5ml × 1 瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8℃保存 显色剂 A液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8℃保存 显色剂 B液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8℃保存 终止液 3ml× 1 瓶 6ml × 1 瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （ 20ml× 20 倍）× 1 瓶 （20ml ×30 倍）× 1 瓶 2-8℃保存 样本处理及要求 ： 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.  细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分 钟左右（ 2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（ PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融 . 不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标 准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl， 浓度分别为 36ng/L ， 24ng/L ，12ng/L ， 6ng/L， 3ng/L ）。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再